[发明专利]用于氯霉素残留检测的单克隆抗体及酶联免疫方法与试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种能识别氯霉素的单克隆抗体以及用于检测氯霉素的酶联免疫分析方法与试剂盒。

背景技术

氯霉素作为一种广谱抗生素，具有良好的抗菌效果和低廉的价格，广泛用于治疗各种敏感菌感染。然而，氯霉素对造血系统有严重不良反应，可导致不可逆的再生障碍性贫血。许多国家和地区都制定了相关法律来控制氯霉素的使用，我国农业部也已将氯霉素列为禁用药，在所有动物源性食品中不得检出(农业部235号公告，2002)。

目前国内外氯霉素的残留检测方法主要有仪器分析方法和免疫学分析方法。仪器方法主要是采用液相-质谱联用和气相-质谱联用，具有测定结果准确可靠，分离度好，能进行多残留分析等优点，但是需要昂贵的设备、复杂的前处理和专业的操作人员，在很大程度上限制了它的使用。酶联免疫检测方法(ELISA)是一种经典的免疫分析方法，具有特异性好、灵敏度高、操作简单、检测费用低等优点，适合兽药残留监控系统中批量检测。

近年来，有关氯霉素残留ELISA检测方法的报道较多，如表1所示。

表1近年有关氯霉素残留ELISA检测方法的研究

可见，现有检测氯霉素残留的ELISA方法已经较为成熟，国内外也有商业化的氯霉素残留ELISA检测试剂盒，如德国拜发、北京望尔、美国柏尔等公司均有相关产品。但这些检测方法和试剂盒大多基于多克隆抗体，不利于保持不同批次产品的性能稳定。由于氯霉素属于零残留药物，对相关抗原抗体的纯度、灵敏度、均一性等各种性能指标要求越来越高。因此，研究一种基于高灵敏度特异性单克隆抗体的氯霉素残留ELISA快速检测方法及试剂盒，对大批量样品中氯霉素残留检测具有重要意义。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种能特异性识别氯霉素的单克隆抗体。

本发明的第二个目的是利用该单克隆抗体，建立一种能用于动物组织中氯霉素残留检测的酶联免疫方法。

本发明的第三个目的是提供适用于氯霉素残留检测的酶联免疫试剂盒。

本发明的第四个目的是提供所述单克隆抗体在制备检测氯霉素的酶联免疫试剂盒中的应用。

本发明的第五个目的是提供含有所述单克隆抗体的试剂盒在动物组织氯霉素残留检测中的应用。

本发明通过以下技术方案实现：

一种能识别氯霉素的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC NO：C201152的杂交瘤细胞HSBSA/4B7所分泌的。

上述杂交瘤细胞4B7，保藏在位于湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏号为CCTCC NO：C201152。

进一步，本发明提供了一种适用于氯霉素残留检测的酶联免疫方法，该方法包括免疫原、包被原、抗体的制备以及样品的处理和检测等步骤，具体如下：

(1)将半抗原氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS)与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到免疫原CAP-HS-BSA；

(2)将氯霉素半琥珀酸酯与卵清蛋白(OVA)偶联得到包被原CAP-HS-OVA；

(3)利用步骤(1)的免疫原免疫小鼠，通过细胞融合与筛选得到保藏号为CCTCC NO：C201152的杂交瘤细胞HSBSA/4B7；

(4)用保藏号为CCTCC NO：C201152的杂交瘤细胞HSBSA/4B7制备单克隆抗体；

(5)用步骤(2)的包被原包被固相载体(如酶标板)；

(6)将待测样品用乙酸乙酯提取、氮气吹干、正己烷净化和样品稀释液重新溶解得到待测物；

(7)对步骤(6)的待测物进行酶联免疫检测，

步骤(6)样品稀释液的组分及配比为：NaCl 8.0g，KH₂PO₄ 0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g，KCl 0.2g，加双蒸水至1000mL。

本发明以上述单克隆抗体和包被原作为核心试剂与常规的其他试剂组合，制成了能检测氯霉素的酶联免疫试剂盒，结合上述酶联免疫方法，实现了对氯霉素的酶联免疫检测。

本发明的单克隆抗体对氯霉素的识别专属性强，灵敏度高，检测方法精密度好、准确性高。

附图说明

图1为本发明的技术路线图。

图2为本发明制备氯霉素单克隆抗体的间接竞争ELISA反应标准曲线，X轴为氯霉素标准溶液浓度对数值，Y轴为光密度值除以“零”孔光密度值(B/B₀)。