[发明专利]检测黄曲霉素的试剂盒或试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及检测黄曲霉素的试剂盒或试纸条。

背景技术

随着人类生活水平的改善，食品安全日益成为餐桌上人们最为关注的问题之一吗，人们每天都会食用的牛奶可能会含有对人体健康有害的黄曲霉素M₁。哺乳动物摄入被黄曲霉素B₁污染的饲料或食品后，在体内可被羟化而生成黄曲霉素M₁。研究表明，黄曲霉素M₁为强致癌剂。世界卫生组织制定食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15μg/kg，美国联邦政府有关法律规定人类消费的牛奶中的含量不能超过0.5μg/kg，其他动物饲料中的含量不能300μg/kg。我国今年发布的《GB 2761-2011食品中真菌毒素限量》国家标准中规定食品中黄曲霉素M₁在乳及乳制品中的限量为0.5μg/kg。而欧盟国家规定更加严格，原奶、热处理奶及加工奶产品中M₁限量为0.05μg/kg，婴儿食品(包括婴幼儿奶)中M₁限量为0.025μg/kg。因此，建立特异、敏感的黄曲霉素M₁的检测方法是当务之急。

目前国内外研究主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、免疫亲和柱法以及酶联免疫法等。TLC法的特异性较差，灵敏度也相对较差，所需标准品浓度较高，潜在的污染性较高。HPLC法所需仪器设备投资大，操作技术要求高，净化柱消耗较多，检测成本较高，免疫亲和柱特异性较好，但需结合HPLC仪和荧光光度计才能定量检测，检测技术要求和成本较高。ELISA法相比而言，操作简便、快捷、污染较小、灵敏度也较高，适合批量样品的普检和筛选，特别是研制成功的试剂盒，给检测人员带来很大的方便，同时也节省了成本，符合目前国际上检测领域的发展方向。免疫胶体金层析技术不需任何仪器设备和试剂，特别适合于基层单位大批量时间紧的检测和大面积普查，因此酶免疫法在食品安全分析中应用广泛。

发明内容

本发明的目的是提供检测黄曲霉素试剂盒的或试纸条。

本发明提供的检测黄曲霉素的酶联免疫试剂盒，包括抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞2A1分泌的单克隆抗体。

抗黄曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞2A1，简称杂交瘤细胞2A1，已于2012年2月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.5779。

所述试剂盒可为如下1)至4)中的任意一种：

1)包括式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物、所述单克隆抗体和酶标记抗抗体的试剂盒；其中，所述偶联物作为包被原；

2)包括式(I)所示化合物的酶标记物、所述单克隆抗体和抗抗体的试剂盒；其中，所述抗抗体作为包被原；

3)包括式(I)所示化合物的酶标记物和所述单克隆抗体的试剂盒；其中，所述单克隆抗体作为包被原；

4)包括式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物和所述单克隆抗体的酶标记物的试剂盒；其中，所述偶联物作为包被原。

式(I)。

式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联物具体如式(II)所示。

式(II)。

所述载体蛋白可为卵清蛋白(OVA)或牛血清白蛋白(BSA)。

所述偶联物中，式(I)所示化合物与载体蛋白的偶联比具体可为(8-10)∶1。所述偶联比指的是摩尔比。式(I)所示化合物与所述载体蛋白具体可通过活性酯法偶联。

所述试剂盒还包括洗涤液、样品浓缩液、底物显色液和终止液中的至少一种。

每1升洗涤液可按照如下方法配制得到：将10ml吐温20、5g叠氮化钠和990ml磷酸盐缓冲液混合，得到洗涤液。所述磷酸盐缓冲液可为pH7.2-7.6、0.005M-0.015M的磷酸盐缓冲液，具体可为的浓度可为pH7.4、0.01M)的磷酸钠缓冲液。

所述样品浓缩液可为浓度为0.03mol/L-0.05mol/L的磷酸盐缓冲液，优选为pH7.4、0.04mol/L的PBS缓冲液。