[发明专利]一种湖北贝母种球的生产方法

权利要求书

1.一种湖北贝母种球的生产方法，其特征在于包括如下操作步骤：

a、培养基的配制

愈伤组织诱导培养基：MS+ 6-BA 2-3mg/L+ NAA 0.2-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂6-6.5g/L，pH值5.9-6.0；

愈伤组织增殖培养基：MS +6-BA 2-3mg/L+NAA 0.2-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂6-6.5g/L，pH值5.9-6.0；

愈伤组织分化培养基：MS+ 6-BA 2-3mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6-6.5g/L，pH值5.9-6.0；

试管鳞茎诱导培养基：1/2 MS+ NAA 0.5-1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6-6.5g/L，pH值5.9-6.0；

b、湖北贝母试管鳞茎的诱导

外植体的选择与表面消毒：在春季湖北贝母出苗盛期，选择饱满、无病虫害的鳞茎，在4℃低温贮藏一周，取出洗净表面泥土，去掉外层老鳞茎，以幼嫩鳞茎作为外植体，经75％酒精浸泡30-60s，用0.1％升汞水溶液浸泡8min，再用无菌水冲洗3次，每次5min；

愈伤组织的诱导：将表面灭菌的湖北贝母外植体在无菌条件下，纵切成0.3-0.6cm的小块，鳞片近轴面向上接种在愈伤组织诱导培养基上，在培养室温度为20±1℃，光照时间约为12h，光照强度为1600-2000Lx下培养30d，诱导出湖北贝母愈伤组织；

愈伤组织的增殖：在诱导出的湖北贝母愈伤组织中选择淡黄色或绿色、结构较为疏松的愈伤组织，将其切成0.5cm的小块，转接至愈伤组织增殖培养基上，在培养室温度为20±1℃，光照时间约为12h，光照强度为1600-2000Lx下培养40d增殖出淡黄色或绿色、结构疏松、呈颗粒状的湖北贝母愈伤组织；每隔40d按同样的方法进行愈伤组织的增殖，继代2-3次；

愈伤组织的分化：在增殖后的湖北贝母愈伤组织中选择淡黄色或绿色、结构疏松、呈颗粒状、生长旺盛的愈伤组织，将其切成0.5cm的小块，转接至愈伤组织分化培养基上，在培养室温度为20±1℃，光照时间约为12h，光照强度为1600-2000Lx下培养40d分化出不定芽或致密的愈伤组织；

试管鳞茎的诱导：将长势良好的不定芽或致密的湖北贝母愈伤组织，接种至试管鳞茎诱导培养基中，在培养室温度为20±1℃，光照时间约为12h，光照强度为1600-2000Lx下培养20d，再将其移至环境温度为4-10℃，自然光照射下，20d即可得到大量健壮的湖北贝母再生植株，同时在植株的基部长出多个试管鳞茎；

c、湖北贝母种球的培育

将诱导出的湖北贝母试管鳞茎埋藏在沙土中，4℃低温贮存30d，即可得湖北贝母种球。