[发明专利]一种堆肥发酵滤液对土壤线虫多样性的防控方法

说明书

技术领域

本发明属于环境保护技术领域，涉及以城市生活垃圾堆肥中提取出的有益菌种的应用。更具体的说是一种堆肥发酵滤液对土壤线虫多样性的防控方法。

背景技术

堆肥化（Composting）是指在有控制的条件下，使有机废弃物在微生物（主要为细菌）作用下，发生降解，并同时使有机物向稳定的腐殖质方向转化的过程。堆肥化后的产物称之为堆肥（Compost）。堆肥过程可以将混合物的体积有效地减少40%-50%，并且可以依靠在高温阶段中代谢产生的热量杀死垃圾中的病原物质。堆肥不是一项新的技术，但用这种方法处理城市固体垃圾，符合环境的利益，因为在堆肥过程中清除或者减少了城市固体垃圾中的毒性并使得最终的产物可以被用来进行再利用。堆肥的程序包括原料的预处理、原料发酵和后处理，堆肥过程受水分、氧含量、C/N比、温度、pH和通风情况等因素的影响。

微生物种类繁多，自然界中仅有极少数的微生物得到鉴定，能够存活、培养的种类更是少之又少，至多为微生物总量的l%。目前，国内外对于堆肥中的微生物进行了一系列理论和实践的研究。对于应用堆肥可能出现的环境问题也已经引起了人们的重视，但如何解决这些问题还缺少细致深入的研究，目前，如何提高城市生活垃圾堆肥的质量，解决堆肥应用过程中可能产生的环境问题一直是相关科研人员研究关注的热点。对于堆肥中的微生物组成及堆肥过程中的微生物变化的研究已有诸多报道，但对于将堆肥中微生物分离、应用于其他基质的研究却少有报道。

苏云金芽孢杆菌是目前国际上生产量最大并成功地用于防治农、林、贮粮害虫和一些卫生害虫的微生物杀虫剂，苏云金芽孢杆菌在形成芽孢的同时，可以形成一种由杀虫晶体蛋白组成的伴孢晶体，它的主要杀虫活性成分是伴孢晶体蛋白。研究发现，这种蛋白对多种农林害虫具有特异性杀伤作用。昆虫取食芽孢晶体混合物后，晶体在昆虫体内的中肠碱性环境和蛋白酶的作用下被降解形成杀虫活性蛋白，研究结果表明这些毒蛋白单独作用或不同蛋白间协同作用对昆虫具有不同程度的毒杀作用，进一步加强苏云金芽孢杆菌在防治和控制害虫危害方面的研究，对于保护人类生存环境实现可持续发展具有重大意义。苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)是目前产量最大、使用最广的生物杀虫剂。关于采用苏云金芽孢杆菌发酵滤液用来调节草坪基质线虫的方法尚为见文献报道。

线虫是一类世界性分布的重要植物病原物，其寄生范围广，环境适应性强，几乎每种作物都受到线虫的侵害。随着人们环保意识的增强，利用杀线虫微生物开发生物杀线虫剂，具有十分巨大的经济效益与环境效益。目前国内外已有研究报道说明不同的微生物对线虫的活动有抑制作用。黄福常等研究发现不同浓度，不同pH值的黑曲霉发酵滤液均具有杀线作用，其中以发酵原液pH为3.0时杀线效果最佳，其杀线作用为100%。Neidig等研究发现荧光假单胞菌的次生代谢产物对食细菌类线虫有强烈的抑制作用，从而减少土壤中细菌的天敌数量。徐华潮等（2010）在室内条件下测定了17株苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白对松材线虫的杀线活性，发现菌株020、RBT-200701的伴胞晶体蛋白对松材线虫有明显的毒杀作用, 其校正死亡率分别大于80%和70%。本实验通过向草坪土壤基质中加入苏云金芽孢杆菌的发酵过滤液，研究了不同堆肥微生物过滤液对土壤线虫的影响，为土壤线虫的生物防治提供依据。

发明内容

本发明采用的苏云金芽孢杆菌（拉丁名：Bacillus thuringiensis）菌种保藏号:CFCC10206,保藏单位：中国林业微生物菌种保藏管理中心，对外可以提供。

生理生化特性：细胞呈革兰氏阳性，杆状，大小为1.0-1.2×3-5μm。形成半孢晶体，对阿拉伯糖甘露醇不产酸产淀粉酶，硝酸盐还原到亚硝酸盐。

苏云金芽孢杆菌毒性：对人、畜低毒，大鼠口服急性LD₅₀ 852.7-856.7毫克/公斤，对家禽、鸟类、鱼、畜等低毒。

本发明将配制成不同浓度的苏云金芽孢杆菌发酵滤液接种到草坪建植体系中。通过研究不同浓度的苏云金芽孢杆菌发酵滤液对土壤线虫的防治方法，为草坪植物的建植提供依据。

为实现上述目的，本发明提供如下的技术方案：

一种堆肥发酵滤液对土壤线虫多样性防控方法，其特征在于按如下的步骤进行：

(1)苏云金芽孢杆菌的分离：苏云金芽孢杆菌本身有市售；也可以分离自天津小淀垃圾堆肥处理厂的生活垃圾堆肥；本发明从生活垃圾堆肥所得到的苏云金芽孢杆菌生理生化性质与市售的苏云金芽孢杆菌相同，分离的方法如下：