[发明专利]一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法有效

专利信息
申请号: 201210052578.2 申请日: 2012-03-01
公开(公告)号: CN102586167A 公开(公告)日: 2012-07-18
发明(设计)人: 潘力;王坤;杨慧林;钟景儒 申请(专利权)人: 华南理工大学;广州市澳键丰泽生物科技有限公司
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N9/10;C12N15/63;C12R1/125
代理公司: 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 代理人: 裘晖
地址: 510640 广*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 重组 枯草 芽孢 杆菌 生产 谷氨酰胺 方法
【权利要求书】:

1.一株重组的枯草芽孢杆菌,其特征在于是由以下步骤构建得到:

(1)构建枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S:PCR扩增白浅灰链霉菌蛋白酶subtilisin-like protease基因;PCR扩增P43启动子+samyQ信号肽基因;然后通过融合PCR将P43启动子+信号肽基因与subtilisin-like protease基因连接,再将融合PCR扩增产物连接入PKS2质粒基因,最后将重组的PKS2质粒转化入枯草芽孢杆菌WB800,得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S;

(2)构建枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG:PCR扩增茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因,然后将扩增产物连接入表达载体pBEP43中,得到融合表达质粒pBEP43-proMTG;将质粒pBEP43-proMTG转化入步骤(1)的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S中得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG;

所述的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG已于2011年12月31日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2011492。

2.权利要求1所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用。

3.根据权利要求2所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于包括以下步骤:将枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG在37℃的LB培养基中培养12~14h,得到活化的枯草芽孢杆菌B.subtilisWB800S/proMTG;然后将活化的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG以体积比1-2%的接种量接种到LB培养基中,37℃发酵24-96h,将发酵液离心、取上清液,将上清液纯化即得到可溶性的转谷氨酰胺酶。

4.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:所述的LB培养基中添加有卡那霉素。

5.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:所述的发酵时间为48h。

6.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:步骤(3)所述的离心是8000rpm离心5min。

7.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:步骤(3)所述的纯化是用亲和层析柱纯化,以咪唑溶液洗脱。

8.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:所述的亲和层析柱为HisTrap FF crude柱。 

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