[发明专利]一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法有效
申请号: | 201210052578.2 | 申请日: | 2012-03-01 |
公开(公告)号: | CN102586167A | 公开(公告)日: | 2012-07-18 |
发明(设计)人: | 潘力;王坤;杨慧林;钟景儒 | 申请(专利权)人: | 华南理工大学;广州市澳键丰泽生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N9/10;C12N15/63;C12R1/125 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 裘晖 |
地址: | 510640 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 重组 枯草 芽孢 杆菌 生产 谷氨酰胺 方法 | ||
1.一株重组的枯草芽孢杆菌,其特征在于是由以下步骤构建得到:
(1)构建枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S:PCR扩增白浅灰链霉菌蛋白酶subtilisin-like protease基因;PCR扩增P43启动子+samyQ信号肽基因;然后通过融合PCR将P43启动子+信号肽基因与subtilisin-like protease基因连接,再将融合PCR扩增产物连接入PKS2质粒基因,最后将重组的PKS2质粒转化入枯草芽孢杆菌WB800,得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S;
(2)构建枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG:PCR扩增茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因,然后将扩增产物连接入表达载体pBEP43中,得到融合表达质粒pBEP43-proMTG;将质粒pBEP43-proMTG转化入步骤(1)的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S中得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG;
所述的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG已于2011年12月31日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2011492。
2.权利要求1所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用。
3.根据权利要求2所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于包括以下步骤:将枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG在37℃的LB培养基中培养12~14h,得到活化的枯草芽孢杆菌B.subtilisWB800S/proMTG;然后将活化的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG以体积比1-2%的接种量接种到LB培养基中,37℃发酵24-96h,将发酵液离心、取上清液,将上清液纯化即得到可溶性的转谷氨酰胺酶。
4.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:所述的LB培养基中添加有卡那霉素。
5.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:所述的发酵时间为48h。
6.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:步骤(3)所述的离心是8000rpm离心5min。
7.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:步骤(3)所述的纯化是用亲和层析柱纯化,以咪唑溶液洗脱。
8.根据权利要求3所述的重组的枯草芽孢杆菌在生产转谷氨酰胺酶中的应用,其特征在于:所述的亲和层析柱为HisTrap FF crude柱。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华南理工大学;广州市澳键丰泽生物科技有限公司,未经华南理工大学;广州市澳键丰泽生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210052578.2/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。