[发明专利]一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法及其应用

说明书

技术领域

    本发明所属的领域为生物技术领域，尤其是涉及一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法及其应用。

背景技术

南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus，SRBSDV）是一种由白背飞虱传播危害的病毒，水稻一旦发病，损失严重。SRBSDV自2001年首次在广东阳西县发现后，为害日趋严重。尤其90年代以后，杂交水稻种植面积的大幅度增加和吡虫啉的大范围高强度施用，使白背飞虱逐渐取代褐飞虱而成为优势种群，导致近年来我国南方大部分稻区白背飞虱连年暴发，2008年南方水稻黑条矮缩病毒病扩散至长江流域，2009年该病毒病在我国的发生面积约40万hm²，晚稻严重受害，超过0．67万hm² 水稻基本失收。2010 年该病害在我国广西、广东、江西、湖南、福建、贵州、云南、浙江、安徽、海南等13个南部省份暴发成灾。2011年该病毒病仍在湖南、贵州、安徽、云南等多个南方省份发生流行。SRBSDV病毒粒体球状，直径70～75 nm。病毒基因组为双链RNA(dsRNA)，共10个片段，由大到小分别命名为SI～S10，其中S10编码病毒的外壳蛋白。水稻的各个生育期均可受到SRBSDV侵染，但不同生育期的稻株感病后表现症状有所不同：初期感病的稻株明显矮缩，叶色深绿，上部叶的叶面可见凹凸不平的皱褶，拔节期地上数节节部有气生须根及高节位分枝，病株茎秆表面有乳白色大小约1～2 mm的瘤状突起，瘤突呈蜡点状纵向排列成一短条形，早期乳白色，后期褐黑色，不抽穗或仅抽包颈穗；分蘖期和拔节期感病稻株矮缩不明显、能抽穗，但穗型小、实粒少、粒重轻。南方水稻黑条矮缩病毒病的发生流行给我国的农业生产造成了严重的损失。

南方水稻黑条矮缩病毒由白背飞虱介导传毒，病毒可在白背飞虱体内繁殖，白背飞虱一旦获毒，即终身带毒，若虫及成虫均能传毒，且白背飞虱高效传毒，水稻病株上扩繁的二代高龄若虫，可80%带毒。但该病毒不能经卵传播，植株间也不互相传毒。近年来我国南方水稻黑条矮缩病毒病发生处于上升时期，暴发态势仍将延续，应强化我国南方水稻黑条矮缩病的早期监测和预警，以单抗为核心建立的血清学方法是最经济、最有效的检测白背飞虱体内及水稻中SRBSDV的高通量的检测方法，因而筛选高灵敏度、高特异性的抗体尤为重要。此外筛选抗病品种是防治水稻病毒病最经济、最有效的方法。但由于该病依赖白背飞虱传播危害，且水稻毒源极难长期保存，使南方水稻黑条矮缩病的抗性品种选育受到许大限制。本发明专利利用种植于温室或人工植物生长箱内的发病水稻或冷冻保存的感染南方水稻黑条矮缩病毒的水稻组织饲毒白背飞虱，获得携带SRBSDV的白背飞虱，用于抗SRBSDV单抗的筛选，并可用于接种水稻，在人工条件下快速鉴定抗南方水稻黑条矮缩病毒病的水稻品种，为抗南方水稻黑条矮缩病毒病的水稻资源的发掘、抗性品种选育和SRBSDV与媒介昆虫之间的互作等研究提供基础。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法及其应用。

携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法包括如下步骤：

1）白背飞虱的获得：

从非南方水稻黑条矮缩病毒发生地区的水稻田间采集捕获白背飞虱若虫后在室内用非抗虫水稻品种的无毒稻苗饲养，待白背飞虱成虫交配后单头虫单独产卵，随机抽取群体中10%的白背飞虱用RT-PCR和dot-ELISA方法检测带毒情况，保留不带毒雌虫的后代并建立室内种群，以后每代随机抽取种群中10%的白背飞虱用RT-PCR和dot-ELISA方法确定白背飞虱不携带南方水稻黑条矮缩病毒，即获得不携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱；

2）白背飞虱的获毒：

白背飞虱从冷冻保存的水稻或玉米病株中获毒：