[发明专利]肺腺癌易感基因无创检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测肺腺癌易感基因无创检测试剂盒，其特征在于：检测CYP1A1基因上Ile462Val及MSPI位点多态性，XRCC1基因上Arg399Gln位点多态性，MTHFR基因上C677T位点多态性，GSTM1基因缺失与否(Present/Null)位点多态性，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)位点多态性的6个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物与DNA测序引物、Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、SAP酶、ExoI酶、BigDye mix、EDTA溶液、70％乙醇溶液、100％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH₂O等。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的特异性引物对是指针对CYP1A1基因上Ile462Val及MSPI位点多态性，XRCC1基因上Arg399Gln位点多态性，MTHFR基因上C677T位点多态性，GSTM1基因缺失与否(Present/Null)位点多态性，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)位点多态性的6个单核苷酸多态性位点，能特异性扩增出包含这6个SNPs位点的DNA片段的引物对。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的DNA测序引物是针对CYP1A1基因上Ile462Val及MSPI位点多态性，XRCC1基因上Arg399Gln位点多态性，MTHFR基因上C677T位点多态性，GSTM1基因缺失与否(Present/Null)位点多态性，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)位点多态性的6个单核苷酸多态性位点而设计，能通过DNA测序技术特异性检测出上述6个SNPs位点基因型的DNA测序引物。

4.根据权利要求1所示的试剂盒，其特征在于，所含的6对特异性引物序列如下：

(1)CYP1A1(Ile462Val)正向引物：5′CTTGCCTGTCCTCTATCCTTTG3′

   CYP1A1(Ile462Val)反向引物：5′CAGGCTGAACCTTAGACCACA3′

(2)CYP1A1(MspI)正向引物：5′GGGAGGAAGAAGAGGAGGTAG3′

   CYP1A1(MspI)反向引物：5′AGGTTCTTGAAAGCAGGGACT3′

(3)XRCC1(Arg399Gln)正向引物：5′TGACCTTGCGGGACCTTAG3′

   XRCC1(Arg399Gln)反向引物：5′CCAAGACCCTTTCACTCCTATC3′

(4)MTHFR(C677T)正向引物：5′AGGGAGGCTTCAACTACGC3′

   MTHFR(C677T)反向引物：5′GCGGTTGAGGGTGTAGAAGT3′

(5)GSTM1(Null/Present)正向引物：5′GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC3′

   GSTM1(Null/Present)反向引物：5′GTTGGGCTCAAATATACGGTGG3′

(6)GSTT1(Null/Present)正向引物：5′TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC3′

   GSTT1(Null/Present)反向引物：5′TCACCGGATCATGGCCAGCA3′

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所含的6条DNA测序引物序列如下：

(1)CYP1A1(Ile462Val)测序引物：5′CTTGCCTGTCCTCTATCCTTTG3′

(2)CYP1A1(MspI)测序引物：5′GGGAGGAAGAAGAGGAGGTAG3′

(3)XRCC1(Arg399Gln)测序引物：5′TGACCTTGCGGGACCTTAG3′

(4)MTHFR(C677T)测序引物：5′AGGGAGGCTTCAACTACGC3′

(5)GSTM1(Null/Present)测序引物：5′GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC3′

(6)GSTT1(Null/Present)测序引物：5′TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC3′

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂盒的组分和含量包括：

(1)PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul，25mM dNTP混合液0.2ul，5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul，20uM特异性引物对，每条引物各0.25ul，ddH₂O 19.175ul。

(2)PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶0.75ul，10U/ul ExoI酶0.375ul，ddH₂O 3.875ul。

(3)测序反应体系：25％BigDye mix1ul，3.2uM DNA测序引物1ul，125mMEDTA溶液1ul，100％乙醇溶液15ul，70％乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH₂O2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。