[发明专利]肺鳞癌易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种肺鳞癌易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估肺鳞癌发病的风险级别，并作为预防和治疗肺鳞癌的方向指导。

背景技术

肺鳞癌又称为鳞状上皮细胞癌，包括梭形细胞癌，是最常见的类型，约占原发性肺癌的40％-50％。肺鳞癌多见于老年男性，与吸烟关系非常密切。肺鳞癌的治疗多数病人确诊时已是肺癌晚期，咳嗽、咳嗽胸痛、消瘦、贫血等是小细胞肺癌的主要临床表现。该疾病是多基因疾病，研究发现，XPD基因，GSTT1基因在肺鳞癌变过程中有着不可忽视的作用，这为提前检测出肺鳞癌发病的高危人群提供了科学依据。

着色性干皮病基因(XPD)是一种重要的DNA损伤修复基因，参与DNA核苷酸切除修复。XPD基因几个核苷酸序列中存在多态性，其中751Lys/Gln多态性比较常见。当XPD基因的第751位Lys→Gln时，DNA损伤修复能力降低，基因组稳定性下降，抵抗致癌物质或其他外界因素破坏作用的能力降低，增加了癌症发病风险。

分子生物学研究表明，携带GSTT1缺失型的个体整个基因缺失并丧失功能，从而相当于增加了环境毒素和致癌物质的浓度，提高了个体罹患一系列类型癌症的风险。国内外研究表明，携带GSTT1缺失型的个体，肺癌的风险增加，GSTT1缺失型是中国人群重要的肺癌遗传易感因素之一。

综上所述，鉴于XPD基因，GSTT1基因在肺鳞癌变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出受检者在肺鳞癌发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患肺鳞癌的高危人群，从而有针对性的预防和治疗肺鳞癌，这对于降低肺鳞癌的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于XPD基因上Lys751Gln，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)的2个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估肺鳞癌发病的危险因子的基础上，本发明提供一种肺鳞癌易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测XPD基因上Lys751Gln，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)的2个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等)；

PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA测序反应组件(包括BigDye mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对(每条引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。

测序反应体系：25％BigDye mix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；125mMEDTA溶液1ul；100％乙醇溶液15ul；70％乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1.检测试剂盒的使用

1、抽提DNA模板

刮取受检者口腔黏膜上皮细胞，用酚氯仿法抽提基因组DNA。

2、PCR扩增反应

使用检测试剂盒中的PCR反应组件，其中，含有下列引物对：

(1)XPD(Lys751Gln)正向引物：5′TCCTGCGATTAAAGGCTGTG3′

   XPD(Lys751Gln)反向引物：5′TACGGACATCTCCAAATTCATTC3′