[发明专利]口蹄疫病毒VP1基因重组小反刍兽疫病毒活载体疫苗构建及应用

权利要求书

1.一种表达口蹄疫病毒VP1基因的重组小反刍兽疫病毒疫苗，优选所述口蹄疫病毒为Aisa 1型，更优选所述口蹄疫病毒VP1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.根据权利要求1所述的重组小反刍兽疫病毒疫苗，其中所述口蹄疫病毒VP1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求1所述的重组小反刍兽疫病毒疫苗，其中用于表达口蹄疫病毒VP1基因的小反刍兽疫病毒疫苗是PPRV Nigeria75/1(PPRV/N75/1)。

4.根据权利要求1-3中任何一项所述的重组小反刍兽疫病毒疫苗，其中所述口蹄疫病毒VP1基因位于所述小反刍兽疫病毒疫苗的编码磷蛋白(P)的基因和编码基质蛋白(M)的基因之间。

5.根据权利要求4所述的重组小反刍兽疫病毒疫苗，其为rPPRV/101VP1。

6.根据权利要求1-5中任何一项所述的重组小反刍兽疫病毒疫苗在制备预防小反刍兽疫和/或口蹄疫的疫苗中的应用。

7.一种生产根据权利要求1-5中任何一项所述的重组小反刍兽疫病毒疫苗的方法，该方法包括：

(1)构建转录质粒，该转录质粒包括其中插入口蹄疫病毒VP1基因的小反刍兽疫病毒疫苗的基因组全长cDNA序列；

(2)构建一个或多个转录辅助质粒，所述辅助质粒能够分别表达所述小反刍兽疫病毒的核蛋白(N)、磷蛋白(P)、和多聚酶大蛋白(L)；

(3)将所述转录质粒和转录辅助质粒共转染小反刍兽疫病毒疫苗复制许可的宿主细胞，培养转染后的宿主细胞，优选所述小反刍兽疫病毒疫苗复制许可的宿主细胞是BHK细胞或Vero细胞；和

(4)从转染细胞的细胞悬液中拯救重组小反刍兽疫病毒。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述转录质粒是pCI-PPRV/101VP1。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述转录辅助质粒分别是质粒pCI-N、pCI-P和pCI-L。

10.根据权利要求7-9中任何一项的方法制备的重组小反刍兽疫病毒疫苗，优选为rPPRV/101VP1。