[发明专利]一种海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗细菌抗生素、抗肿瘤药物及杀虫剂领域，具体地说是一种海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物及其制备和应用。 

背景技术

目前在临床治疗中发现病原微生物的耐药性越来越强，尤其是耐甲氧基青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)造成的感染越来越严重，很多传统抗生素已基本丧失疗效；另外临床治疗发现肿瘤的耐药性也在不断增强，且出现多药耐药性现象，已有抗肿瘤药物在临床化疗中越来越力不从心，因此有必要寻找新型的抗生素和抗肿瘤药物来满足临床药物研发的需要。此外，在农业生产因为过度使用各种化学合成农药，造成严重的食品、土壤及水污染，并经过食物链危及人体健康和生态平衡，农药残留也严重阻碍了我国的农产品出口；而生物农药具有不易产生抗药性、对非靶生物安全、环境友好且易于自然降解等优点，对于人类健康、环境保护及农业可持续发展具有重要的意义。海洋真菌来源的抗细菌抗生素、抗肿瘤药物及杀虫剂具有易于大规模发酵生产、高效、易于克服抗药性等优点，易于实现药源稳定供给，具有较好的经济、社会与环境效益。 

发明内容

本发明的目的是提供一种天然的附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物及其制备和应用。为实现上述目的，本发明采用真菌爪曲霉（Aspergillus unguis）CGMCC No.3372菌种，其于2009年10月29日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.3372,株号为DLEP2008001；技术方案如下： 

所述的海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物的制备方法，包括如下操作步骤： 

I.发酵 

将爪曲霉(Aspergillus unguis)CGMCC No.3372接种于真菌液体培养基中静止发酵，过滤，分别收集菌丝体和发酵液； 

其中，所述真菌液体培养基组成，每升中含：土豆汁500mL，天然粗海盐配制的40g/L盐水500mL，蔗糖20g； 

II.粗提 

将步骤I获得的发酵液经乙酸乙酯萃取并浓缩，将步骤I获得的菌丝体用有机溶剂提取并浓缩，将所得浓缩物合并，即为粗提物； 

其中，所述有机溶剂为氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一种或几种； 

III.分离纯化 

将步骤II获得的粗提物经硅胶柱层析、反相柱层析、凝胶柱层析或高压液相色谱分离得 到氯代缩酚酸环醚类化合物(I)。 

具体的，对于上文描述的制备方法，其中，步骤III所述的分离纯化条件为： 

a.将步骤II获得的粗提物经硅胶柱层析，用石油醚-二氯甲烷或石油醚-氯仿进行梯度洗脱，收集以洗脱液体积比1∶2～3梯度的洗脱的组分； 

b.将步骤a收集的洗脱组分再进行硅胶柱层析，洗脱液为体积比40～30∶1的石油醚-乙酸乙酯； 

c.将步骤b收集的洗脱组分进行反相柱层析，洗脱液为体积百分含量为90％的甲醇水溶液； 

d.将步骤c收集的洗脱组分进行凝胶柱层析，洗脱液为甲醇；收集符合下述特征的组分，即海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物(I)： 

TLC检测收集在254nm紫外线照射下呈单个、均匀的深紫色斑点，茴香醛硫酸不显色的组分； 

在检测用的薄层层析条件下Rf值为0.25的组分；所述的检测用薄层层析板为GF254硅胶板，展开剂为体积比为3∶1的石油醚-乙酸乙酯，添加0.1％体积的乙酸； 

在检测用的高效液相分析条件下保留时间为22.5min的单一色谱峰的组分；所述的检测用高效液相色谱分析条件为Hypersil C-18柱，填料粒径5微米，柱尺寸4.6mm×250mm，流动相为体积百分含量为55％的甲醇水溶液，添加万分之一体积的改性剂乙酸，流速1ml/min。 

具体的，对于上文描述的制备方法，其中，步骤a或b中所述的硅胶柱层析，所用硅胶为200～300目。 

具体的，对于上文描述的制备方法，其中，步骤I中静止发酵的条件是：28℃培养箱静止发酵20天之后，加入发酵液一半体积的乙酸乙酯杀灭真菌。 

具体的，对于上文描述的制备方法，其中，步骤II中的发酵液用乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩；菌丝体粉碎后用甲醇提取三次，减压浓缩。 

本发明的另一方面在于，利用上述的制备方法获得一种氯代缩酚酸环醚类化合物，其在 常温常压下为无色针晶。