[发明专利]一种小鼠α干扰素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术领域，尤其是涉及对对小鼠血清、血浆、细胞培养上清液或其它相关生物液体中α干扰素含量的检测。

背景技术

干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性作用。

目前，检测干扰素较为常用的方法为酶联免疫吸附法（ELISA）。其优点在于特异性强，操作简便，特别适于大批量样品的检测；但是ELISA由于采用大分子的酶标记，其灵敏度和稳定性及测量范围还有一定的局限。TRFIA是超微量检测领域中一项新兴的检测技术，是利用免疫反应的高度特异性和标记示踪物的高度灵敏性相结合而建立的一类微量物质检测技术。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一种小鼠α干扰素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其检测方法。本试剂盒有效期长、操作流程短、灵敏度高、标准曲线量程宽、可全自动操作、应用范围十分广泛。

本发明的技术方案如下：

一种小鼠α干扰素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，α干扰素简称IFN-α，由以下部分组成：具有微孔的IFN-α抗体包被板（1），缓冲液（2），小鼠IFN-α标准（3），生物素IFN-α抗体（4）的冻干品，铕标记的Eu³⁺-链霉亲和素（5）的冻干品，洗涤液（6）和增强液（7）。

试剂盒的检测方法：取IFN-α抗体包被板（1），加入小鼠IFN-α标准（3）或其他处理好的样品到各自的微孔中，再加入生物素IFN-α抗体（4），振荡反应，用洗涤液（6）洗涤，再加入Eu³⁺-链霉亲和素（5），进行反应，用洗涤液（6）洗涤，再加入增强液（7）振荡后测量荧光强度cps，对照标准曲线计算样品中的IFN-α含量。

更具体的检测方法：取IFN-α抗体包被板（1），加入50??l的小鼠IFN-α标准（3）或其他处理好的样品到各自的微孔中，再加入50??l以缓冲液（2）稀释的生物素IFN-α抗体（4），25℃振荡1小时，洗涤液（6）洗三次，再加入以缓冲液（2）稀释的100??l Eu³⁺-链霉亲和素（5），25℃振荡0.5小时，用洗涤液（6）洗六次，再加入200??l增强液（7）振荡5分钟后测量荧光强度cps，从标准曲线计算样品中的IFN-α含量。

所述具有微孔的IFN-α抗体包被板（1）的微孔有96或48孔。所述其他处理好的样品可以为小鼠血清、血浆、细胞培养上清液等天然或重组的小鼠IFN-β。

本发明有益的技术效果在于：

TRFIA的基本原理是用三价稀土离子及其螯合物作为示踪物，代替荧光物质、同位素、酶和化学发光物质，标记抗原、抗体、核酸探针等物质。当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点（特异性强、荧光光谱的Stokes位移、寿命长），用时间分辨荧光分析仪，测定免疫反应最后产物的荧光强度。根据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。

TRFIA技术采用原子标记，方法稳定，而且空间位阻小，灵敏度高，TRFIA的荧光计数可以跨越4个数量级，克服了ELISA中的吸光度范围只有2个数量级的限制，检测的灵敏度和量程较ELISA成倍增加，使检测更灵敏、更稳定。采用TRFIA方法建立的TRFIA检测限在10^-18mol/L，大大高于ELISA的10^-10 mol/L和放射免疫分析（RIA）10^-12 mol/L。

附图说明

图1为本小鼠α干扰素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒示意图。

图中：1、IFN-α抗体包被板；2、缓冲液；3、小鼠IFN-α标准；4、生物素IFN-α抗体；5、Eu³⁺-链霉亲和素；6、洗涤液；7、增强液。

图2为荧光值-浓度标准曲线。

具体实施方式

1、铕标记的Eu³⁺-链霉亲和素5的制备：