[发明专利]复合微生物发酵牧草饲料的制备方法

权利要求书

1.复合微生物发酵牧草饲料的制备方法，其特征在于按以下方法制备：

1).发酵菌株的选择及培养基的制备

A菌——康宁木霉Trichoderma koningii，菌株编号：CICC 13037，培养基为：麸皮～马铃薯滤液100毫升蔗糖2克，PH 6，麸皮～马铃薯滤液的制备方法：5克麸皮和20克马铃薯加100毫升水煮沸过滤，蒸馏水补足至100毫升。

B菌——胶红酵母Rhodotorula mucilaginosa，菌株编号：CICC 31192，培养基为：5°Bé麦芽汁琼脂。

C菌——枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，菌株编号：CICC 10063，培养基为：氯化钠0.5克琼脂2克，牛肉膏1克蛋白胨1克，水100毫升PH 7.2。

D菌——枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，菌株编号：CICC 10089，培养基为：氯化钠0.5克琼脂2克，牛肉膏1克蛋白胨1克，水100毫升PH 7.2。

2).原菌种活化

分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

3).母发酵剂的制备

分别量取4株菌培养基各200ml于4只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2)步骤中已经活化的菌种，在30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养24小时，作为母发酵剂。

4).生产发酵剂的制备

首先配制质量百分比浓度为10％的脱脂奶乳浊液，分装于4只500mL三角瓶内，每瓶200mL，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃、摇床转速110转/分钟条件下摇床培养40-42小时，检测4株菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥10⁹个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜10⁹个/ml，继续培养，直至达到10⁹个/ml。

5).粉末冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度低于1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘乘装，放入冻干机进行冷冻干燥，制备粉末冻干菌种。

6).复合微生物发酵剂冻干粉的制备

按各粉末冻干菌种重量，取A菌粉末2-3份，B菌粉末3-5份，C菌粉末2-4份，D菌粉末2-3份，充分混匀后制成复合微生物发酵剂冻干粉。

7).牧草预处理

将收割后的新鲜牧草切割成0.5cm-1cm的牧草段。

8).复合微生物发酵剂冻干粉活化

首先配制质量百分比浓度为2％的葡萄糖溶液1千克，取1克复合微生物发酵剂冻干粉，25℃-30℃条件下完全溶解于1千克葡萄糖溶液中，制成复合微生物菌悬液，静止状态下活化30分钟。

9).发酵

将经过8)步骤活化后的复合微生物菌悬液1千克，均匀喷洒在20千克经过7)步骤预处理的牧草段上，然后将牧草段堆放于发酵池中，堆放厚度40cm-50cm，25℃-30℃条件下静止发酵48小时。

10).干燥

将经过9)步骤发酵处理的牧草在40℃-45℃条件下通风干燥，直至牧草中水分含量低于15％，停止干燥，然后包装即为成品。