[发明专利]一种可同时抑制T、B淋巴细胞功能的免疫融合蛋白、其制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种可同时抑制T、B淋巴细胞功能的免疫融合蛋白、其制备方法及其应用，属于生物工程技术领域。

背景技术

自身免疫性疾病(autoimmunity diseases)是机体免疫系统对自身成分发生免疫应答的疾病状态，往往是由于T淋巴细胞和B淋巴细胞免疫功能亢进而导致的一类疾病。自身免疫性疾病在人群中的发病率约为3％～5％。自身免疫疾病种类很多，包括类风湿关节炎(RA)、银屑病、系统性红斑狼疮(SLE)、硬皮病、I型糖尿病(Type I diabetes)等一类疾病。

T淋巴细胞和B淋巴细胞是人体免疫系统的两种最为重要的功能细胞，在机体免疫应答和免疫反应中扮演重要角色。T淋巴细胞介导细胞免疫，B淋巴细胞介导体液免疫，二者既相互区别又相互联系。T细胞激活时需要其细胞膜上的抗原识别受体(TCR)识别抗原提呈细胞(APC)表面的主要组织相容性复合体(MHC)沟槽中特异抗原肽，构成T淋巴细胞免疫活化的第一信号。T淋巴细胞和抗原提呈细胞(APC)表面众多的协同刺激分子(costimulatory molecules)和相应受体(costimulatory molecules receptor，CMR)构成活化的第二刺激信号，例如CD4与MHC II类分子配对；CD8与MHC I类分子配对；CD28与B7(CD80)配对；LFA2(CD2)与LFA3(CD58)配对；LFA1与ICAM1配对等均可作为第二信号，其中以CD28与B7(CD80)相互作用在T淋巴细胞活化时最为重要。同样地，B淋巴细胞对胸腺依赖抗原(TDAg)的刺激反应中需要与T淋巴细胞相互作用，B淋巴细胞才能活化。首先B淋巴细胞通过胞膜上的抗原识别受体(BCR)与抗原结合，抗原内化后，经胞内溶酶体等加工处理成顺序决定簇抗原，顺序决定簇抗原与MHC II类分子结合表达于细胞膜表面，B淋巴细胞作为抗原提呈细胞(APC)将抗原递呈给辅助性T淋巴(T h)细胞，Th细胞活化并表达膜分子和分泌多种淋巴因子(IL-2，IL-4，IL-6等)，在这些分子作用下B淋巴细胞表达高亲和力的BCR和丰富的MHCII类分子。在B淋巴细胞活化中CD40分子与CD40L的结合，B淋巴细胞活化因子(BlyS)分别与其三种受体即B细胞成熟抗原(BCMA)、穿膜蛋白活化物(TACI)和B细胞活化因子受体(BAFF-R)的结合，为B细胞活化的第二刺激信号。

综上所述，T淋巴细胞和B淋巴细胞活化中共刺激信号(第二刺激信号)扮演着重要的角色，没有共刺激信号T淋巴细胞和B淋巴细胞将不能活化。鉴于自身免疫性疾病往往是由于T淋巴细胞和B淋巴细胞过度活化，功能亢进而导致的一类疾病。所以，阻断T淋巴细胞和B淋巴细胞活化共刺激信号可以降低免疫反应，达到治疗自身免疫性疾病的目的，是目前治疗自身免疫性疾病的措施之一。下表是全球已上市和在研临床III期以上阻断共刺激信号抗体类药物的品种列表。

表1上市和在研临床III期以上阻断共刺激信号抗体类药物的品种列表

表中alefacept、abatacept、belatacept和atacicept的结构均为受体-Fc融合蛋白。该类结构已经被证实是除了抗体药物以外，能清除体内多余配体分子的一种有效手段。目前上市的有etanercept(1998)、alefacept(2003)、abatacept(2006)、rilonacept(2008)和belatacept(2011)均为此结构，其中不乏“重磅炸弹”级药物，etanercept在2009年和2010年全球销售额达80亿和84亿美元。受体-Fc融合蛋白中受体结构域在融合蛋白中执行结合配体的功能，而Fc部分(包括轻链恒定区)具有多种作用：易检测，可使用通用的抗人二抗进ELISA检测；易纯化，通过与protein A的结合而使用亲和层析方便地纯化；增加半衰期，IgG重链恒定区约有氨基酸残基330个，轻链恒定区约有氨基酸残基110个，组合成4肽链后分子量超过100kDa，大大延长药物在体内的半衰期；可提供额外的生物学效应如补体激活、ADCC效应等免疫调节活性。此外，与抗体药物相比受体-Fc融合蛋白不必进行繁琐的抗体筛选和人源化过程，具有亲和力高、免疫源性低等优点。