[发明专利]结合分子

说明书

本发明涉及经历了亲和力成熟的功能性仅有重链的抗体多样性库的制造及其用途。本发明也涉及类别特异性仅有重链的抗体多样性库的制造和用途，也涉及具有抗体重链功能性优选抗体重链结合功能性、恒定区效应子活性及任选其他效应子功能的多价多肽复合物的制造和用途。本发明还涉及在转基因小鼠中响应抗原激发产生全功能性仅有重链的抗体的方法。本发明特别涉及产生任何种类的人抗原特异性、高度亲和力、仅有重链的抗体或多种混合物的方法，以及分离及表达全功能性VH抗原结合域的方法。

本申请为分案申请，原申请的申请日为2005年7月22日，申请号为200580031529.9(PCT/GB2005/002892)，发明名称为“结合分子”。

发明领域

本发明涉及经历了亲和力成熟的功能性仅有重链的抗体多样性库(diverserepertoire)的制造及其用途。本发明也涉及类别特异性仅有重链的抗体多样性库的制造和用途，也涉及具有抗体重链功能性优选抗体重链结合功能性、恒定区效应子活性及任选其他效应子功能的多价多肽复合物的制造和用途。

本发明也涉及在转基因小鼠中响应抗原激发产生全功能性仅有重链的抗体的方法。本发明特别涉及产生任何种类的人抗原特异性、高度亲和力、仅有重链的抗体或多种混合物的方法，分离及表达全功能性VH抗原结合域的方法。

本发明也涉及产生包含重链功能性优选重链效应子活性及其他结合和效应子功能的多价多肽复合物。

也描述了使用本发明方法产生的仅有重链的抗体及其他多价结合复合物及其用途。

发明背景

在21世纪开发的新药中将存在很大比例的单克隆抗体或其变异体。单克隆抗体治疗已经被公认为优选途径用于治疗类风湿性关节炎和克罗恩病且在癌症治疗中有很大进展。用于治疗心血管疾病及感染性疾病的基于抗体产品也在开发之中。单克隆产品识别并结合靶配体(例如TNF_α)上单一、明确的表位。用于治疗的人单克隆抗体的制造依然依赖于哺乳动物细胞培养。装配包括两个重链和两个轻链的复合体(H₂L₂复合体)及接着翻译后糖基化过程排除使用的细菌体系。通过哺乳动物细胞培养制造抗体的生产成本和资金耗费高且在缺乏可接受的其它疗法时有限制基于抗体的疗法潜力的风险。许多种转基因生物能够表达全功能性抗体。包括植物、昆虫、雏鸡、山羊和牛，但是仍然没有用于制造销售的治疗性产品。

可在大肠杆菌(E.coli)中制造功能性抗体片段但是除非在制造过程中进行聚乙二醇化否则产物在血清中稳定性通常较低。

双特异性抗体复合物是基于工程Ig能够结合相同或不同抗原上两种不同表位的分子。双特异性结合蛋白单独或与其他结合剂联用参入抗体显示有希望的治疗模式即获得人免疫功能而具治疗效果，例如清除病原体(Van Spriel等，(1999)J.Infect.Diseases，179，661-669；Tacken等，(2004)J.Immunol.，172，4934-4940；美国5,487,890)、癌的治疗(Olennie和van der Winkel，(2003)Drug Discovery Today，8，503-5100)和免疫治疗(VanSpriel等，(2000)Immunol.Today，21，391-397；Segal等，(2001)J.Immunol.Methods，248，1-6；Lyden等，(2001)Nat.Med.，7，1194-1201)。

制造方面问题的复杂性在于双特异性抗体产物以两种或多种H2L2复合体为基础。例如两套或多套重链和轻链基因的共同表达可致形成高达10种不同的组合，其中仅有一种为所需的异源二聚体(Suresh等，(1986)Methods EnzymoL，121，210-228)。