[发明专利]反胶束萃取纯化木质素过氧化物酶的方法

权利要求书

1.一种反胶束萃取纯化木质素过氧化物酶的方法，包括以下步骤：

（1）配制反胶束溶液：配制包括生物表面活性剂、异辛烷和正己醇的反胶束溶液，其中所述生物表面活性剂为鼠李糖脂；

（2）前萃过程：将已备好的木质素过氧化物酶粗酶液与所述反胶束溶液混合，搅拌，离心后静置分相，留取上层有机相；

（3）后萃过程：将所述上层有机相与缓冲液混合，搅拌，离心后静置分相，留取下层水相，得到纯化后的木质素过氧化物酶溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反胶束溶液中鼠李糖脂的浓度为2.75 mmol/L～3.0mmol/L；所述反胶束溶液中正己醇与异辛烷的体积比为1∶1～1∶1.2。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述木质素过氧化物酶粗酶液是由黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）经培养发酵后制备得到。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述培养发酵的过程具体包括：在高压灭菌后的液体发酵培养基中接种黄孢原毛平革菌孢子，每升所述液体发酵培养基中接种的孢子数为4×10⁸～5×10⁸个，37℃～38℃温度、150r/min～180r/min转速下摇床培养6～8天，除去所得培养液中的孢子和菌丝，离心处理后即得木质素过氧化物酶粗酶液。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）的前萃过程中，所述木质素过氧化物酶粗酶液的pH值为3.0～3.5，所述木质素过氧化物酶粗酶液中还含有浓度为0.04mol/L～0.045mol/L的KCl溶液。

6.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）的前萃过程中，所述木质素过氧化物酶粗酶液与所述反胶束溶液是按1∶1～1∶1.2的体积比混合。

7.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）的后萃过程中，所述缓冲液为柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的pH值为6.0～6.5，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中还含有浓度为0.5mol/L～0.55mol/L的KCl溶液。

8.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）的后萃过程中，所述上层有机相与所述缓冲液是按1∶1～1∶1.2的体积比混合。