[发明专利]选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂，其特征在于，其配方组成为：万古霉素3～50 mg/l，萘啶酮酸5～10.0 mg/l，TMP3～5.0 mg/l，两性霉素1～2.0 mg/1, Nisin 8～10 mg/1。

2.根据权利要求1所述选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂的制备方法，其特征在于，主要包括下列步骤：

1）培养基的配制：

培养基配方:930 ml/l脑心浸液培养基，80 ml/l胎牛血清，1.0 g/lβ-CD，0.04 g/l TTC,pH 7.2～7.4；

1.1）按上述配方配制好培养基，装入500 ml锥形瓶(300ml/瓶)，用封口膜将瓶口封紧，121℃ 高压消毒15～30 min，待高压锅压力降至0后，取出培养瓶，自然冷却；

1.2）解冻绵羊血，56℃、30 min灭活补体；

1.3）将步骤1.1）冷却至40℃左右的上述培养基倒入无菌培养皿中，加入预先配制好的选择性抗生素和步骤1.2）解冻的绵羊血8～1Oml/100ml；再将该无菌培养皿放置15～30 min，自然凝固后尽快封闭培养基；其中，选择性抗生素配方为：万古霉素3～50 mg/l、萘啶酮酸5～10.0 mg/l、TMP3～5.0 mg/l、两性霉素1～2.0 mg/1和 Nisin 8～10 mg/1；

2）细菌接种与培养：

2.1）用吸管吸取0.1ml HP菌悬液，滴于步骤1.3）的固体培养基上，用L形棒涂开；

2.2）将步骤2.1）已接种好的培养皿放入厌氧培养罐，盖紧顶口，将培养罐内气压抽至0或接近0，立即冲入混合气体；其中，混合气体为5% O₂、10% CO₂ 和85% N₂ ；

2.3）将步骤2.2）培养罐置于37℃ 恒温箱中培养，72 h后观察菌落生长情况；HP生长的最佳湿度>9O%；

3）细菌的保存：

选取对数生长期的HP进行保存；用接种环刮取培养菌于保存液中，调整细菌浓度为1×10⁸ ～ 1×10⁹CFU／ml，保存液基质为脑心浸液和100%甘油；将菌液分装至0.5 ml Ep管中，每管0.2～O.3 ml，置-7O℃或液氮中保存。