[发明专利]一种适于榆属品种区分和鉴定的ISSR指纹图谱构建方法

权利要求书

1.一种适于榆属品种区分和鉴定的ISSR指纹图谱构建方法，其特征在于适于榆属品种区分和鉴定的ISSR指纹图谱构建方法按以下步骤进行：

一、DNA提取：

以不同榆树品种成年植株为材料，取新生叶片采用适合提取榆树DNA的改良CTAB法提取DNA，取部分DNA溶液测其浓度，稀释至20ng/uL，于-20℃保存备用；

二、ISSR-PCR扩增及电泳检测：

采用25μL反应体系中，10×Buffer(Mg²⁺free)2.5μL，dNTPs0.25mmol/L，引物800pmol/L，DNA模板30ng，Taq酶1.5U，MgCl₂ 2.5mmol/L；

PCR扩增程序条件为：94℃预变性5min，35个循环，每个循环包括，94℃变性45s，退火1min，72℃延伸1.5min，结束循环后72℃延伸6min，4℃保存；

用含0.5μl/mlEB的1.0％琼脂糖凝胶，在1×TBE缓冲液中，以2.5V/cm²的电场强度电泳，在紫外凝胶成像系统上观察并照相、记录；

三、DNA指纹图谱构建：

根据每条引物呈现的条带信息建立指纹图谱：以榆树品种编号和扩增普带带型为纵列，以每条谱带的位点编号为横行，在每一横纵交结处，有扩增谱带用“1”表示，没有扩增谱带用“0”表示，分别制得每条引物对不同品种的DNA指纹图谱表，以引物FI-55对35个榆树品种构建的指纹图谱为：

引物FI-50对35个榆树品种构建的指纹图谱为：

四、利用构建的DNA指纹图谱进行榆属品种鉴定：

将待鉴定的榆属品种样品在步骤三中所述条件下建立的指纹图谱与已构建的DNA指纹图谱相比较，与所建DNA指纹图谱不同的即为其他物种或者是榆属中的新品种，即完成适于榆属品种区分和鉴定的ISSR指纹图谱构建方法。

2.根据权利要求1所述的一种适于榆属品种区分和鉴定的ISSR指纹图谱构建方法，其特征在于步骤三中所用榆属的具体品种如下：

其中作图品种1～9采自黑龙江省帽儿山和黑龙江森林植物园；作图品种10～18和鉴定品种1～17均采自山东省金乡县白洼林场。