[发明专利]一种酶解提取青蒿素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种倍半萜内酯的提取方法，尤其是一种从中药青蒿中提取青蒿素的方法。

背景技术

疟疾是一种由疟原虫造成的全球性急性寄生虫传染病，主要的流行于热带地区和亚热带地区。全世界范围内，每年约有1.5亿人出现疟疾的临床症状，100万至300万人因感染疟疾而死亡，其中大部分为儿童和孕妇等对疟原虫免疫力较差的人群。

青蒿为菊科植物黄花蒿(Artemisia annua L.)的全草，其所含的青蒿素(Artemisinin)是由我国自主研发，并被世界卫生组织(WHO)认定为治疗恶性疟疾唯一有效的药物。我国是青蒿的主要产地，占全球总产量的90％以上，依托我国青蒿种植的资源优势，开展青蒿素提取工艺的研究，对青蒿素的进一步产业化意义重大。

现有青蒿素的提取方法主要有传统提取法和超临界流体提取法两种，传统提取法包括回流提取法、冷浸提取法、索氏提取法等。传统提取法用有机溶剂反复萃取，溶剂浪费严重，且提取率和原料利用率较低；而超临界流体法虽提取率相对较高，但也因设备昂贵，普及受到极大限制。

根据传质理论，在天然活性成分的提取过程中，溶剂首先向固体表面扩散，渗透到固体表面，然后进人固体内部及其微孔隙内溶解天然活性成分，最后通过固体微孔隙向固体表面扩散，并在固体表面与溶剂主体间浓度差作用力下，天然活性成分向溶剂主体扩散，完成提取传质过程。由于青蒿素几乎被纤维素构成的细胞壁所包围，传统的提取方法无法使细胞壁破裂，存在巨大的传质阻力，导致提取效果不佳。通过一定的物理手段或化学手段致使青蒿素叶细胞壁疏松或破裂，将有助于有机溶剂将青蒿素从中溶出，可有效提高提取效率。

发明内容

本专利提供了一种青蒿素的提取方法，以青蒿叶为主要原料，经先酶解再回流两步工艺，可得到较高纯度的青蒿素，该方法具有工艺简单、提取率高和易放大制备等优点。

本发明的技术方案如下：

1)将青蒿叶粉碎后，加入2～20倍重量的水溶液和一定量酶制剂，控制温度为30～60℃，恒温加热30min～120min，冷却，过滤，滤液用有机溶剂反复萃取，滤饼低温干燥后备用；

2)往上述滤饼加入50～100倍重量的有机溶剂，控制温度为30～60℃，恒温加热30～120min，冷却，过滤，滤饼用有机溶剂反复洗涤，滤饼弃去，滤液和洗涤液进行合并；

3)合并1、2步骤所得萃取液、洗涤液和滤液，用2％的氢氧化钠溶液进行洗涤，再用水洗至中性，于50℃减压浓缩，得青蒿素粗品。粗品经过乙醇重结晶，得青蒿素精制品。

进一步地，步骤1中所用的水溶液为稀硫酸溶液或稀盐酸溶液(pH 2～7)，所述的酶为纤维素酶，每克青蒿叶所用的酶量为5～20U，酶解时间为优选为30min。

更进一步地，步骤1、2中所述有机溶剂为乙醚或石油醚，步骤2中有机溶剂的加入量为青蒿叶粉末重量的80倍；步骤2恒温加热时间优选为60min。

本发明方法利用纤维素酶使青蒿叶细胞壁疏松、破裂，减小传质阻力。此外，酶解还能有效去除蛋白质等杂质，提高青蒿素的纯度。选用乙醚或石油醚作为提取溶剂，利用乙醚或石油醚对青蒿素良好的溶解性，将青蒿素从酶解后疏松的微孔隙中溶出，有效提高青蒿素的提取率。

相对于传统提取法和超临界流体提取法，本发明方法具有耗时短，提取率高、纯度高和耗能低等优点，是一种绿色和高效的青蒿素的提取方法。

按照上述内容，在不脱离本发明上述基本技术思想的前提下，根据本领域的普通技术知识和惯用手段，对上述内容还可以有多种形式的修改、替换和变更。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的内容作进一步的说明：

实施例1

称取250g青蒿叶粉末加入反应瓶中，向其中加入1L稀硫酸溶液(pH 6.0)和2250U的纤维素酶，置于50℃恒温水浴中，酶解120min后，抽滤，滤饼烘干至恒重。滤液用乙醚萃取三次，将萃取液合并。

在上述滤饼中加入2L乙醚进行加热回流，回流120min后，冷却至室温，抽滤，滤饼用乙醚反复洗涤，合并以上萃取液、滤液和洗涤液，用2％的氢氧化钠溶液进行洗涤，再用水洗至中性。于50℃减压浓缩，得青蒿素粗品，最后用乙醇重结晶，得青蒿素精品2.07g。

实施例2

称取250g青蒿叶粉末加入反应瓶中，向其中加入1L稀盐酸溶液(pH 4.5)和3750U的纤维素酶，置于50℃恒温水浴中，酶解30min后，抽滤，滤饼烘干至恒重。滤液用石油醚萃取三次，将萃取液合并。