[发明专利]一种用于染色体整合、进化的表达质粒

权利要求书

1.一种用于染色体整合、进化的表达质粒，含有2个FRT位点、抗性筛选基因a、复制子、启动子（P）及其后面的多克隆位点(MCS)、终止子（TTR）、用于诱导染色体进化过程的抗性筛选基因β、噬菌体整合位点(attP)、及启动子与抗性筛选基因β两侧连接的2个异源的核苷酸序列相同片段A1和A2，抗性筛选基因a与抗性筛选基因β为不同的抗性基因。

2.根据权利要求1所述的表达质粒，其特征在于，在两个FRT位点的一侧按顺时针方向依次含有片段A1、启动子（P）及其后面的多克隆位点（MCS）、终止子（TTR）、用于诱导染色体进化过程的抗性筛选基因β、片段A2、噬菌体整合位点(attP)，在两个FRT位点的另一侧则含有抗性筛选基因a和复制子。

3.根据权利要求1所述的表达质粒，其特征在于，所述抗性筛选基因a为卡那霉素抗性基因(kan)。

4.根据权利要求1所述的表达质粒，其特征在于，所述复制子为大肠杆菌的条件复制子(ori Rγ)。

5.根据权利要求1所述的表达质粒，其特征在于，所述噬菌体整合位点(attP)为 attP_HK、attP_P21、attP_λ、attP_φ80和attP_P22中的任一种。

6.根据权利要求1所述的表达质粒，其特征在于，所述启动子为P_T5、P_T7、P_tac、P_trc、P_lac、P_BAD、P_Ltet、P_Llac等启动子中的任一种。

7.根据权利要求1所述的表达质粒，其特征在于，所述用于诱导染色体进化过程的抗性筛选基因β为三氯生抗性基因（fabI）、氯霉素抗性基因（cat）、氨苄青霉素抗性基因(bla)、庆大霉素抗性基因(gen)、甲氧苄氨嘧啶抗性基因(dhfr)、壮观霉素抗性基因(aadA)、链霉素抗性基因(aadA)、四环素抗性基因(tetA)、乳酸菌素抗性基因中的任一种。

8.根据权利要求1所述的表达质粒，其特征在于，所述A1、A2片段为来自于除大肠杆菌外的其他生物的异源片段，在大肠杆菌中的同源性低且不表达，大小为800~1200kbp。

9.根据权利要求1~8任一项所述的表达质粒，其特征在于，所述表达质粒转化的宿主菌为大肠杆菌(Escherichia coli)。