[发明专利]一种建鲤配组繁殖的方法

权利要求书

1.一种建鲤配组繁殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）对建鲤繁殖群体采血液或鳍条，采用DNA提取法提取基因组DNA；

（2）根据6个与建鲤增重相关的SNP位点，用步骤（1）的基因组DNA为模板，构建PCR-RFLP法对其SNPs进行基因型检测；

（3）选择含有4~6个增重较快基因型的个体作为侯选亲本；

（4）对侯选亲本PCR-RFLP法电泳检测酶切条带，用遗传分析软件进行数字化分析处理，获得每个个体之间的遗传距离，并构建进化树；

（5）选择侯选亲本遗传距离大于群体平均遗传距离、性腺发育成熟以及配组的后代能富集4个以上体重增重较快基因型的个体进行配组繁殖。

2.根据权利要求1所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（2）PCR-RFLP法中，PCR扩增条件为：总体积12.5 μL，内含基因组DNA 50~100 ng，其余组份按照Taq酶说明书添加，反应结束取3~5 μL PCR液在1.0%琼脂糖凝胶电泳检测其浓度和条带单一性。

3.根据权利要求1所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（2）PCR-RFLP法中，PCR扩增程序为：94℃预变性 2min；94℃变性30s，退火 40s，72℃延伸 1min，30个循环；72℃ 延伸8分钟，4℃保存。

4.根据权利要求1所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于，所述步骤（2）PCR-RFLP法中，RFLP检测条件为： 5 μL PCR液在总体积10 μL中进行酶切，内含限制性内切酶 2 U，根据使用说明推荐的温度酶切3~5 h，然后终止酶切反应，用1.2～2.0%琼脂糖凝胶电泳检测酶切条带，进行基因型判定。

5.根据权利要求1所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（2）PCR-RFLP法中，与6个与建鲤增重相关SNP位点名称、引物序列分别为：

位点(1)  jlGHSR1a E1-A450C，上游引物：CAATTCGCATCCTGCTATATATTCG

下游引物：TTAGTATCCCACGAGTTTGTCCCA，

位点(2)  jlGHSR1a I-C386T，  上游引物：TGGTTTGGGTCTCCAGCATCTTT

下游引物：TGTGGATTTGGAGATCAGGTAACG，

位点(3)  jlGHSR1b E1-G159T，   上游引物：TCAGACCTTCCAAAGCTGCCAT

下游引物：CACACTGAGAGCAGTGATGTTCAGA，

 位点(4)  jlGHR1aI3-A43G， 上游引物：ACAGCAGTATTCCTTTTACATAGTAGTAGCAG

下游引物：CACAATACTGTTACTTTAATAGCTGCCTAG，

位点(5)  jlGHR1Be8-C12T， 上游引物：AAACAACCCTCGTACTCTGTTTTTAGAGCA

下游引物：AGCTAGCACGACCCGAATCGTTGTC，

位点(6)  JlIGFBP3bI2-G30T， 上游引物：GGCAATAGAGACCATAGATCCTATGCGG

下游引物：TGTGGATTTGGAGATCAGGTAACG。

6.根据权利要求1所述的建鲤配组繁殖的方法，其特征在于：步骤（4）中使用的遗传分析软件为populations软件和MEGA软件。