[发明专利]CaM结合肽及其应用

说明书

 

技术领域

本发明涉及用于抗肿瘤的多肽药物领域，具体涉及一种CaM结合肽及其应用。

背景技术

目前，癌症的猖獗危胁着人们的身体健康．对顽症的攻克是摆在人类面前的一大难题。在科学发达的今天，人们的着眼点仍放在寻找抗癌作用强而本身副作用小的药物来对付肿瘤。大量资料证实细胞内钙调蛋白(CaM)与肿瘤的形成、生长和增殖密切相关 。

20世纪70、80年代人们就证实了钙调素拮抗剂对肿瘤增殖、转移有肯定的抑制作用。CaM作为胞内Ca²⁺的受体蛋自，参与胞内Ca²⁺浓度的调节，而正常细胞增殖需要钙，因此人们认为CaM 是正常细胞增殖所必需的。现已发现某此肿瘤的发生与发展也与CaM 密切相关：20世纪80年代末，人们就已经发现肿瘤细胞内CaM含量高于正常细胞。许多实验证明细胞内CaM水平与细胞的无序增殖，特别是恶性肿瘤细胞增殖是正相关。如CaM水平与肝癌生长速度呈正相关，啮齿类及鸟类肿瘤中CaM 含量为正常的2-4倍，牛皮癣患者病变区域CaM浓度比正常的区域高30倍。由此可见，CaM 含量的变化会引起细胞的不正常增殖与细咆变异．其次，CaM分子结构的改变可使CaM与其部分靶体，甚至所有靶体间的相互作用发生变化，从而促使癌细胞的生长，例如癌蛋白的发现，就是恶性细胞中CaM 分子发生质的改变的一个倒证，它可以促进癌细胞的生长，使肿瘤细胞在缺Ca²⁺条件下仍然保持旺盛的DNA合成能力。另外CaM结合蛋白发生结构或构象的改变 及CaM对Ca²⁺激活的敏感性发生改变，cAMP含量发生改变都与肿瘤的形成密切相关，因此CaM成为化学抗癌治疗剂的新靶点，从而引起人们极大的关注。

迁移和侵袭是恶性肿瘤发展的关键，也是临床治疗的难题，控制肿瘤的迁移和侵袭是抗肿瘤药物研究的一个重要方向，肿瘤的迁移是一个多阶段的复杂过程，肿瘤侵袭和转移可分为三步，即黏附、降解和移动。黏附是肿瘤细胞侵袭的起始，肿瘤细胞通过表面特定受体与基底膜的层黏连蛋白、纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原等相黏连，然后在蛋白水解酶和相关因子的作用下，侵袭基底膜，降解细胞外基质，肿瘤细胞一旦突破基底膜即在基质内较快侵袭性生长并发生转移。因此，阻断其中任何一个过程，都可以抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。有文献证实：CaM与肿瘤的迁移侵袭密切相关。

肿瘤的生长有两个不同的阶段，即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段。如果没有血管生成，原发肿瘤的生长不会超过1-2mm³。肿瘤血管为肿瘤组织提供新陈代谢所必需的氧气和营养，从而使肿瘤得以迅速的生长并同时为肿瘤的远端转移提供转运。因此近年来抑制血管生成成为抗肿瘤治疗的新策略。近来有文献报道：CaM与肿瘤血管新生也有着密切的关系，CaM抑制剂可以抑制血管新生。因此关于CaM与肿瘤的研究又焕发出新的活力。

不过，目前已知的大部分已知的钙调素拮抗剂专一性不强，且具有不良反应。人们试图寻找专一性强、不良反应小的钙调素拮抗剂，用于肿瘤治疗。本发明的多肽可能成为有效地选择。

发明内容

本发明的目的是提供一种CaM结合肽及其应用，该发明不仅可以抑制HeLa细胞的增殖，迁移，粘附，还可以抑制HUVEC的体外血管新生，因此其可能开发成为一种新型的抗肿瘤药物。

为实现上述目的，本发明提供的CaM结合肽，类型为氨基酸，分子类型为肽，所述CaM结合肽为实验室合成的Sema4D钙调蛋白结合肽，其含有编码对应于Sema4D结合CaM的序列，所述Sema4D钙调蛋白结合肽分子的序列由氨基酸的一字简码组成，表述如下:NH2-GYL PRQ CLK FRS ALL IGK KKP KS-COOH。

CaM 是一种单链酸性小分子可溶性球蛋白，由十九种、148个氨基酸组成，分子量为1.67万，等电点为4.3，是酸性蛋白质。不同生物来源的钙调蛋白，其氨基酸组成和顺序或完全一样，或仅有少许差异,具有分布的广泛性和进化上高度的保守性.它耐酸，耐热，90℃，加热5分钟仍可保留完全的活性。