[发明专利]检测泡型包虫病的免疫层析试条及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及一种免疫层析试条及制备方法，具体来说是一种检测泡型包虫病的免疫层析试条及制备方法。

背景技术

棘球蚴病(echinococcosis)又称包虫病(Hydatid disease或Hydatidosis)，是由棘球属绦虫的幼虫寄生于人、畜体内引起的一种人畜共患寄生虫病，能感染人类的棘球属绦虫有4种：细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus，Eg)、多房棘球绦虫(Echinococcusmultilocularis，Em)、少节棘球绦虫(E.oligarthrus)和伏氏棘球绦虫(E.vogeli)。这4种棘球绦虫的成虫和幼虫期形态不同，可引起不同类型的棘球蚴病。我国有两种棘球蚴病即细粒棘球蚴病(cysticechinococ-cosis，CE)又称囊型包虫病，和多房棘球蚴病(alveolarechinococcosis，AE)又称泡型包虫病。

包虫病是一个重要的世界性公共卫生问题，广泛流行于欧、亚、非和地中海区域沿岸国家，以及澳洲和南美。在我国，包虫病主要流行于西部等12个省、自治区的牧区和农牧区，其中新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙和四川西部最为严重，是世界上包虫病患病率最高的地区。此外，吉林、陕西、云南、贵州和河南等省局部地区也有小范围流行。包虫病流行区受威胁人口约7000万。卫生部《全国人体重要寄生虫病现状调查》报告显示，这12省(区)包虫病患病率为1.084％，据此推算，目前流行区约有病人38万人。由于B超诊断结果有一定的漏检率，实际患病人数可能达60万人以上。血清学检查发现人群的感染率平均为11.98％，感染人数约为700万人，受威胁人口约7000万。

包虫病需要手术或长期服药治疗，效果有限。其中囊型包虫病包囊破裂可导致过敏休克而致患者死亡。泡型包虫病被称为“恶性包虫病”是一种致死性寄生虫病，10-15年的病死率高达90％以上。漏诊的包虫病患者失去治疗时机而危及生命。包虫病不但给患者带来极大的痛苦和沉重的医疗负担，且发病的高峰为20-50岁的青壮年，严重的患者失去劳动力，给社会带来极大的压力，系西部农牧区群众因病致贫，因病返贫的重要原因。此外，由于包虫病在牛羊的感染率相当高(可达90％)，每年因包虫病也给我国畜产品造成的经济损失达数十亿。因此包虫病不但严重危害人民的生命健康，而且严重影响社会和经济发展、边疆稳定。

包虫病的感染可长期(数年或十多年)无症状，一旦症状显现，药物治疗效果差(因有两层厚实的囊包裹使药物难以进入达到有效浓度)，而不得不进行手术治疗，甚至要反复进行手术。因此，研究合适有效的免疫诊断技术用于早期诊断，以提高药物治疗效果，是最有效的降低发病率和死亡率的根本途径，是包虫病防治中亟待解决的问题。

目前对包虫病的诊断极大地依赖影像学方法，如X光检查、B型超声诊断、CT扫描、核磁共振等物理诊断方法。但这些方法不能进行早期诊断(影像学诊断出的包虫病人已不太适合药物治疗)，且对有些囊肿、脓肿或肿块不能进行有效鉴别而误诊。由于影像检查设备携带不便，加之昂贵，且对操作人员的技术要求较高，在疾病诊断与流行病学调查中(特别在边远地区连电力供应都受到限制)的应用受到限制。

免疫学方法在包虫病诊断上的应用越来越受到重视，最有效的免疫学诊断方法是应用纯化天然抗原或重组抗原检测包虫病人特异抗体，常用检测方法有间接血凝法(Indirect haemagglutinationassay；IHA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、酶联免疫电转移印渍法(Enzyme-linked immunoelectrotransfer blot assay；EITBA)，以及金标免疫点印渍法(Gold-labelled dotblotting；GDB；俗称膜法或渗滤法)。但这些方法或费时费力、或需要冷链系统保存试剂、或对仪器设备及操作人员的要求较高而不适合现场使用。

在上述免疫方法中抗原的使用直接决定了检测的敏感性和特异性。包虫病免疫诊断抗原的研究经历了粗抗原、纯化抗原和重组抗原三个阶段。

细粒棘球蚴包囊液粗抗原(HCF)广泛应用于囊型包虫病的诊断，其特点是检测的敏感性较高，可达75％-95％，但易于其他疾病如囊虫病等发生交叉反应。针对这一问题许多学者采用不同的方法对囊液粗抗原进行分离和纯化，显著提高了检测的敏感性和特异性。