[发明专利]检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及一种亲内脏利什曼原虫寄生虫病的检测工具，具体来说是检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条及其制备方法。 

背景技术

利什曼原虫(Leishmania spp.)的生活史有前鞭毛体(promastigote)和无鞭毛体(amastig ote)两个时期。前者寄生于节肢动物(白蛉)的消化道内，后者寄生于哺乳类或爬行动物的细胞内，通过白蛉传播。利什曼原虫分类复杂，内脏利什曼病或称黑热病，是由利什曼原虫(Leishmania donovani)或婴儿利什曼原虫(L.infantum)/恰氏利什曼原虫(L.chagasi)寄生于人体的淋巴-巨噬细胞系统所引起的一种寄生虫病，由媒介白蛉叮咬传播。黑热病患者体内血液中含有能特异性结合所感染的利什曼原虫抗原的抗利什曼原虫抗体，检测受试者体内血液中是否含有利什曼原虫抗体，可作用受试者是否患有黑热病的指标。 

该病在世界范围内流行甚广，包括亚、欧、非及中、南美洲的61个国家，每年新发生的病例数约有50万。在上世纪60年代以前我国也深受其害，病例曾达60万，死亡率极高。准确检测感染和诊断是监测工作急需和治疗的关键所在，因此，对黑热病诊断技术的研究始终受到重视。 

以骨髓、脾等穿刺物涂片染色镜检的方法是黑热病最古老的诊断方法，迄今仍是黑热病诊断的“金标准”。国外报道显示骨髓和淋巴结穿刺物涂片镜检敏感性分别为60％-75％和30％-50％，国内报道以骨髓、淋巴结、脾穿刺涂片镜检检出率依次为：80-90％、46-87％、96-98％。由于这种检测方法对操作人员的技术要求非常高，在疾病诊断与流行病学调查中应用受到限制。 

免疫学方法在黑热病诊断上的应用越来越受到重视，最有效的免疫学诊断方法是应用纯化虫体可溶性抗原或重组抗原检测黑热病人特异抗体，常用检测方法 有间接血凝法(Indirect haemagglutination assay；IHA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、酶联免疫电转移印渍法(Enzyme-linked immunoelectrotransfer blot assay；EITBA)，以及金标免疫点印渍法(Gold-labelled dot blotting；GDB；俗称膜法或渗滤法)。但这些方法或费时费力、或需要冷链系统保存试剂、或对仪器设备及操作人员的要求较高而不适合现场使用。 

发明内容

本发明的目的是提供一种检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条及其制备方法，所述的这种免疫层析试条及其制备方法要解决现有技术中的方法检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病疾病的方法复杂、检出率低的技术问题。 

本发明提供了一种检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条，包括一个样品垫、紧密连接于所述样品垫的含有胶体金标记探针的金标垫、与所述金标垫紧密连接的纤维素膜、和一个紧密连接于所述纤维素膜的吸水垫，所述的吸水垫远离所述的金标垫，在所述纤维素膜上靠近吸水垫的一端设置质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置一条检测线，其特征在于：所述的检测线含有亲内脏利什曼原虫的虫体可溶性抗原，所述的质控线含有特异性结合胶体金标记探针的抗体。 

进一步的，所述的亲内脏利什曼原虫的虫体可溶性抗原来源于亲内脏利什曼原虫虫体的前鞭毛体或无鞭毛体。 

进一步的，所述的胶体金标记探针为金黄色葡萄球菌A蛋白、或链球菌G蛋白、鼠抗人IgG的单抗、或鼠抗人IgG的单抗多抗、或者兔抗人IgG抗体，所述质控线为抗金黄色葡萄球菌A蛋白抗体、或抗链球菌G蛋白抗体、或抗鼠抗人IgG的单抗、或鼠抗抗人IgG的单抗多抗的抗体、或者抗兔抗人IgG抗体的抗体。 

进一步的，亲内脏利什曼原虫虫体可溶性抗原的蛋白浓度为1-20mg/mL，喷涂量为100μL/cm²；胶体金标记探针的浓度以蛋白浓度计为1-5mg/15-20mL。 

进一步的，抗金黄色葡萄球菌A蛋白抗体、或抗链球菌G蛋白抗体、或鼠抗 人IgG的单抗、或鼠抗人IgG的单抗多抗、或者兔抗人IgG抗体溶液的浓度为0.1-5mg/mL，喷涂量为100μL/cm²。 

进一步的，所述免疫层析试条背面设置一个背板。