[发明专利]基于流式细胞术快速定量检测淡水环境中总病毒的方法

权利要求书

1.一种基于流式细胞术快速定量检测淡水环境中总病毒的方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：

第1、水样过孔径为0.22μm的滤膜后加入戊二醛，使戊二醛的最终质量浓度为0.25％，并立即放入4℃冰箱；固定15min后用液氮冷冻并放置于-80℃的冷藏室中保存；

第2、检测前将第1步保存的水样置于室温下解冻；加入Na₂EDTA使最终浓度达到5mmol/l，随后加入荧光染料SYBR Green I储备液；

第3、将第2步处理后的水样于80℃避光染色10min，待冷却至室温后上流式细胞仪检测，水样测试前用Milli-Q水稀释至流式细胞仪检测浓度小于2×10⁵counts/ml。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于第2步中所述的SYBR Green I储备液为：用过孔径0.22μm滤膜的二甲基亚砜(DMSO)稀释100倍SYBR Green I原液作为储备液，保存在-20℃下；染色前，将第1步保存的样品取出并在室温下解冻后，于每1ml中加入5μl SYBR Green I储备液，于80℃避光染色10min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于第3步中所述的流式细胞仪，光源功率为50mW，发射波长488nm的蓝色激光，使用流式细胞仪进行测定时，通过调节滤光片来收集发射光信号，信号收集软件为FlowMax；绿色荧光(FL1)被设定为触发参数，信号收集波长520±20nm，SSC为侧向散射光；所有信号均被收集在绿色荧光与侧向散射光的二维散点图上。