[发明专利]一种高酶活、耐热醛缩酶基因、酶、载体、工程菌及应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种醛缩酶基因，以及该基因编码的醛缩酶，以及含有该基因的载体、工程菌及其应用。

(二)背景技术

醛缩酶作为催化碳碳原子立体成键的酶，可以广泛的应用在有机化学合成中，它可以方便的以小分子为起点向大的复杂分子方向进行不对称催化合成，这个过程在碳水化合物为底物的反应中意义尤为突出。应用酶的高区域选择性，能够容易避开对碳水化合物中的活泼的羟基的保护，更为突出的是在催化碳碳键合成的同时醛缩酶可以引入新的手性中心。正是这种能够高效引入手性碳原子的能力，使得醛缩酶在药物分子合成领域中有着广泛的应用，与化学工艺相比，具有明显优势，如：避免了有毒有害物质的使用，合成可在常温常压条件下进行。从替代传统化学合成工艺催化剂的角度，该酶催化的反应具有很强的绿色属性，对传统化学工艺的绿色化学改造有着重要意义，因而该酶具有广阔的应用前景。

(三)发明内容

本发明的目的是提供一种醛缩酶基因，该基因编码的醛缩酶，以及含有该基因的载体、工程菌及其应用。

本发明采用的技术方案是：

一种来源于Pyrococcus kodakaraensis的醛缩酶基因(DERA)，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：

atgaacaaac gtgaaattgc acgttacatt gatcagacca acctgaaacc atacgcgact60

aaagaagata tcatcaagct gtgtgatgaa gcgatcgaat acggctttta cgccgtttgc 120

gtgaacccgt accgtgtgaa gctggcgaaa gactatctgc gtgaaaagaa tgctgatgtt 180

aaagtagcat ctgttatcgg tttcccgctg ggcgccaccc cgaccgaagt taaagttttc 240

gaagccaaac gtgctctgga agatggtgca gacgagctgg acatggttat caacatcggc 300

gcgctgaaag ataaagacta tgaatatgtt aagaacgaca tcgcagaagt ggttaaagta 360

gcgcacgaac gcggcgctaa agtgaaagta attatcgaaa cttgctacct gaccgaagag 420

gagaaagtga aagcgtgtga gctggccaaa gaggcgggtg ctgacttcgt taagactagc 480

accggtttcg gtaccggtgg tgctaccgtg gaagacgtgc gtctgatgcg caaagtggtt 540

ggcccggaaa tgggcgtaaa agcagctggt ggtattcgca cctatgaaca ggctctggag 600

atgatcgaag caggtgcgaa ccgtatcggc acctcctctg gcgtaaaaat tgtagaaggt 660

gcgccggacg aactcgag 678

由于核苷酸序列的特殊性，任何SEQ NO：1所示多核苷酸的变体，只要其与该多核苷酸具有90％以上同源性，均属于本发明保护范围之列。所述多核苷酸的变体是指一种具有一个或多个核苷酸改变的多核苷酸序列。此多核苷酸的变体可以使生的等位变异体或非生的变异体，包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的氨基酸的功能。

一种高酶活、耐热的醛缩酶，由所述醛缩酶基因编码。具体的，所述醛缩酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：

Met Asn Lys Arg Glu Ile Ala Arg Tyr Ile Asp Gln Thr Asn Leu Lys

1 5 1015

Pro Tyr Ala Thr Lys Glu Asp Ile Ile Lys Leu Cys Asp Glu Ala Ile

2025 30

Glu Tyr Gly Phe Tyr Ala Val Cys Val Asn Pro Tyr Arg Val Lys Leu

354045