[发明专利]从桦褐孔菌中综合提取甾体类化合物、多糖和多酚的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甾体类化合物、多糖和多酚的提取方法，特别是涉及一种从桦褐孔菌中综合提取甾体类化合物、多糖和多酚的方法。

背景技术

桦褐孔菌属于真菌门，担子菌亚门，层菌纲，非褐菌目，锈革孔菌科，褐卧孔菌属，学名Phaeoporousobliquus(per：Fr.)J.Schroet。目前桦褐孔菌的化学组成主要有羊毛脂烷型甾体类化合物、多糖类、多酚类、木质素类、黑色素、生物碱类、单宁化合物、叶酸衍生物以及芳香的香草酸、丁香酸和γ-羟基苯甲酸等。目前，有关研究人员已对这些成分的生物活性展开了研究，并将其应用于恶性肿瘤、糖尿病、心血管疾病、肝病及艾滋病的预防和治疗中。

甾体类物质是桦褐孔菌中一种主要的活性成分，其含量大，活性高，而桦褐孔菌醇则是其中一种主要的化合物，研究发现其具有很好的抗肿瘤活性，因此近年来受到广泛的关注。

桦褐孔菌多糖是桦褐孔菌中的又一种重要的天然活性成分，具有多种生理功能且对人体无毒，因此近年来也受到广泛的关注。研究发现桦褐孔菌多糖具有良好的抗氧化、降血糖、抗肿瘤和免疫调节作用，尤其是显著的降血糖效果和免疫活性使其有望成为预防糖尿病和心血管疾病、增强免疫力的天然药物。

桦褐孔菌多酚是从桦褐孔菌中提取的天然产物，由于桦褐孔菌多酚是一种高效低毒的天然抗氧化保鲜剂，因而在食品工业中主要用于油脂及其制品、油炸及烘烤食品、鱼及肉制品的保鲜，并可代替现在食品工业中常用的人工合成抗氧化剂BHA、BHT。另外，桦褐孔菌多酚在医药方面具有抗病毒、抗菌、抑菌、防龋齿、改善肾功能、降血脂、降血压、降血糖、抗氧化、抗癌等作用，临床研究发现桦褐孔菌多酚对缓解心血管系统病变具有良好作用。

目前通常采用水提取乙醇沉淀或溶剂萃取的方法进行桦褐孔菌中多糖和多酚的提取及分离，由于常规的水提取乙醇沉淀提取方法收率较低，桦褐孔菌多糖收率只有2％～5％，桦褐孔菌多酚收率更低，而溶剂萃取法则会因使用了大量的有机溶剂而造成环境污染。而且到目前为止尚未见到一种能同时提取桦褐孔菌中的甾体类化合物、多糖和多酚的方法的报道和实例。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种产品收率高的从桦褐孔菌中综合提取甾体类化合物、多糖和多酚的方法。

为了达到上述目的，本发明提供的从桦褐孔菌中综合提取甾体类化合物、多糖和多酚的方法包括按顺序进行的下列步骤：

1)将桦褐孔菌在电磨中粉碎成粉末，然后在高压灭菌锅中高压处理1～3小时，以对原料进行前处理；

2)将上述经过高压处理的桦褐孔菌加入到80％浓度的乙醇中，所述桦褐孔菌与乙醇的质量比为1∶10～1∶20，然后在80℃～90℃的温度下回流提取1～2小时，反复浸提3次，之后减压过滤，将滤液合并而得到含有甾体类化合物的桦褐孔菌供试液；

3)在40℃～60℃的温度和0.06～0.1MPa的压力下将上述含有甾体类化合物的桦褐孔菌供试液置于旋转蒸发仪中减压旋蒸至无乙醇，用体积为上述浓缩后桦褐孔菌供试液5～10倍量的水混悬洗涤，之后离心分离，收集沉淀物；

4)将上述收集到的沉淀物干燥即得到甾体类化合物产品；

5)在步骤2)中提取后的残渣中加入去离子水，所述桦褐孔菌残渣与去离子水的质量比为1∶10～1∶30，然后在90℃～100℃的温度下回流提取1～2小时，反复浸提3次，之后减压过滤，将滤液合并而得到含有桦褐孔菌多糖和多酚的桦褐孔菌供试液；

6)在40℃～60℃的温度和0.06～0.1MPa的压力下将上述含有桦褐孔菌多糖和多酚的桦褐孔菌供试液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/10～1/4，然后在浓缩液中加入乙醇至乙醇质量浓度70％以上进行沉淀，之后离心分离，分别收集沉淀物和上清液；然后用2～3倍体积的无水乙醇对上述沉淀物进行洗涤脱色3～5次，之后离心分离，收集二次沉淀物；

7)将步骤6)中收集的二次沉淀物干燥即得到桦褐孔菌多糖产品；

8)将步骤6)中得到的上清液浓缩至无醇味，然后采用动态上样的方法，上样到预处理好的大孔树脂柱子上；上样完成后用水和30％～50％质量浓度乙醇进行梯度洗脱；

9)在30℃～40℃的温度和0.06～0.1MPa的压力下将步骤8)中30％～50％质量浓度乙醇洗脱液置于旋转蒸发仪中减压浓缩无醇味，然后干燥即得到桦褐孔菌多酚产品。

所述的步骤1)中高压处理的压力为100KPA，温度为121℃。

所述的步骤8)中大孔树脂为D101，上样流速为2～3倍柱体积/h；每个梯度的洗脱量为3倍柱体积～4倍柱体积。