[发明专利]一种红掌苞片和花序总RNA的提取方法

权利要求书

1.一种红掌苞片和花序总RNA的提取方法，其特征在于所述方法为：(1)将幼嫩红掌苞片和花序置于研钵中液氮研磨，获得研磨干粉；(2)将装有初始RNA提取液的离心管于63～67℃水浴预热，加入所述的研磨干粉，迅速盖严并剧烈摇晃15～20s，63～67℃水浴静置5～8min，加入初始RNA提取液1/5体积的氯仿A，再次剧烈摇晃15～20s，室温下静置5～8min，离心，获得上清液A；所述初始RNA提取液由终浓度如下的组分构成：0.2g/L十六烷基三甲基溴化铵、0.2g/L聚乙烯基吡咯烷酮、0.073g/L乙二胺四乙酸、1.168g/L氯化钠、0.121g/L Tris、体积浓度0.1％的焦炭酸二乙酯和体积浓度2％的β-巯基乙醇；(3)取上清液A，加入所述上清液A1/5体积的氯仿B剧烈摇晃15～20s后静置5～8min，离心，获得上清液B；(4)取上清液B，加入上清液B1/2体积的8M LiCl溶液，混匀，-20℃放置5～8h，离心，收集沉淀记为沉淀A，沉淀A用体积浓度75％乙醇水溶液洗涤，离心收集沉淀记为沉淀B，沉淀B自然晾干至乙醇刚挥发完全为止，获得所述红掌苞片和花序总RNA。

2.如权利要求1所述的红掌苞片和花序总RNA的提取方法，其特征在于所述方法为：(1)将幼嫩红掌苞片和花序置于研钵中液氮研磨，获得研磨干粉；(2)将装有初始RNA提取液的离心管于65℃水浴预热，加入所述的研磨干粉，迅速盖严并剧烈摇晃15s，65℃水浴静置5min，加入初始RNA提取液1/5体积的氯仿A，再次剧烈摇晃15s，室温下静置5min，13000rpm/min离心15min，获得上清液A；所述初始RNA提取液由终浓度如下的组分构成：0.2g/L十六烷基三甲基溴化铵、0.2g/L聚乙烯基吡咯烷酮、0.073g/L乙二胺四乙酸、1.168g/L氯化钠、0.121g/L Tris、体积浓度0.1％的焦炭酸二乙酯和体积浓度2％的β-巯基乙醇；(3)取上清液A，加入上清液A1/5体积的氯仿B剧烈摇晃15s后静置5min，13000rpm/min离心10min，获得上清液B；(4)取上清液B，加入上清液B1/2体积的8M LiCl溶液，混匀，-20℃放置5h，12000rpm/min离心10min，收集沉淀记为沉淀A，并用体积浓度75％乙醇水溶液洗涤，离心收集沉淀记为沉淀B，沉淀B自然晾干至乙醇刚挥发完全为止，获得所述红掌苞片和花序总RNA。

3.如权利要求1或2所述的红掌苞片和花序总RNA的提取方法，其特征在于步骤(4)所述8M LiCl溶液按如下方法制得：将LiCl溶于水，再加入焦炭酸二乙酯混合，室温下静置1～2d，然后1kg/cm²热压120℃蒸气灭菌20min，冷却获得8M LiCl溶液，所述水和焦炭酸二乙酯的体积比为1∶0.001，所述的LiCl的摩尔浓度为8M。

4.如权利要求1或2所述的红掌苞片和花序总RNA的提取方法，其特征在于步骤(4)所述沉淀B在室温自然晾干时间为10min。