[发明专利]一种葡萄糖脱氢酶的生产方法

权利要求书

1.一种葡萄糖脱氢酶的生产方法，其特征在于：所述生产方法是先构建表达了葡萄糖脱氢酶的重组大肠杆菌并将其接种至初始培养基中进行发酵，发酵过程中通过流加补料技术向包含所述重组大肠杆菌的发酵液中添加补料培养基，当发酵参数达到设定阈值时，再向发酵液中添加诱导剂，并继续发酵一定时间至发酵结束，最后从发酵液的培养物中取得葡萄糖脱氢酶；其中，流加补料时，补料培养基的流加速度随着发酵时间的延长而梯度递增，至添加诱导剂后保持不变。

2.根据权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶的生产方法，其特征在于：所述发酵参数为发酵液的细胞光密度、发酵液中的溶氧或发酵液中的碳源总浓度。

3.根据权利要求1所述的葡萄糖脱氢酶的生产方法，其特征在于：所述生产方法包括以下步骤：

（1）、准备阶段：构建基因工程菌，配制种子培养基、初始培养基和补料培养基；使基因工程菌在所述种子培养基中活化，然后将活化后得到的种子液接种到初始培养基中进行发酵，按体积比，接种时种子液/初始培养基=1%~4%；所述基因工程菌为表达了葡萄糖脱氢酶的重组大肠杆菌；

（2）、发酵过程：当发酵液中的细胞光密度随着发酵的进行依次达到4、8、12、16、20时，通过流加补料技术分批向发酵液中补充补料培养基，且补料培养基的流加速度依次对应为0~10g/l/h、10~20g/l/h、20~30g/l/h、30~40g/l/h、40~50g/l/h；当细胞光密度＞20时，向发酵液中添加诱导剂，且诱导剂在发酵液中的加入质量占发酵液总量的0.01%~0.2%；然后在保持补料培养基的流加速度不变的情况下继续发酵16~20小时；

（3）、从步骤（2）所得发酵液的培养物中取得葡萄糖脱氢酶。

4.根据权利要求1或2或3所述的葡萄糖脱氢酶的生产方法，其特征在于：所述初始培养基包括蛋白胨6~15g/L、酵母粉5~10g/L、甘油6~18g/L、硫酸镁1~4g/L、磷酸盐4~8g/L和氯化钠5~12g/L；所述补料培养基包括蛋白胨、酵母粉和甘油，且按质量计蛋白胨:酵母粉:甘油=2:1:14~15。

5.根据权利要求1或2或3所述的葡萄糖脱氢酶的生产方法，其特征在于：发酵过程中，发酵液的溶氧维持在30%~40%之间，发酵液pH值控制在6.8~7.3之间。

6.根据权利要求1或2 或3所述的葡萄糖脱氢酶的生产方法，其特征在于：所述诱导剂为异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷。

7.根据权利要求1或2或3所述的葡萄糖脱氢酶的生产方法，其特征在于：添加诱导剂前，发酵温度控制在37℃；添加诱导剂后的发酵温度控制在28℃。

8.根据权利要求3所述的葡萄糖脱氢酶的生产方法，其特征在于：步骤（1）中，所述种子培养基包括蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L和NaCl 10g/L，且pH值为7.0。