[发明专利]一种表达IL-17的胶质瘤细胞株

说明书

技术领域

本发明涉及一种表达IL-17的胶质瘤细胞株，具体涉及表达IL-17的胶质瘤细胞株pEGFP-N1-IL-17-U87MG。本发明属于基因工程领域，具体来说，涉及基因重组细胞领域。

背景技术

IL-17是新近发现的免疫细胞亚群Th17的标记分子，其最初通过活化的淋巴细胞库消减杂交鉴定，且被命名为CTLA-8(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原8)。

IL-17被证实与多种病理过程相关，如自身免疫、感染、过敏、排斥反应的。研究表明，IL-17可以激活NF-κB、MAKP-ERK等多条信号途径，通过促进炎症因子、趋化因子、抗菌肽、组织重构分子、基质金属蛋白酶分子的表达，介导多方面的生物学活性。

同时，IL-17也被证明与多种肿瘤相关，目前IL-17被证实至少可以通过以下途径促进肿瘤：

1)上调VEGF、CD31等因子表达，从而促进血管增生，加速肿瘤生长；2)上调IL-6，STAT3信号途径促进肿瘤进展；3)下调Th1表面IL-12Rβ2分子表达，从而下调Th1细胞功能，抵抗有效肿瘤免疫；4)使CD8+细胞共表达IL-17，从而失去细胞毒效应，抗凋亡。

尽管已证实IL-17与多种促进肿瘤的途径相关，但它在肿瘤细胞微环境中的具体作用途径、靶点仍需将进一步研究阐明，以期能够将其作为临床治疗肿瘤疾病的干预靶点。

目前相关研究人员常以IL-17作为外源物质加入肿瘤细胞培养体系中或者是将IL-17短期表达于肿瘤细胞中作为研究IL-17在肿瘤细胞微环境中的具体作用途径、靶点的一个手段；然而这些方法不但不能很直观地观察到携带有IL-17的作用位点，同时也影响对IL-17在肿瘤微环境中作用的深入研究。

因此，发明人希望能够建立一种表达IL-17的肿瘤细胞株，为研究IL-17的促进肿瘤形成的作用机制提供适宜的研究模型材料。

发明内容

本发明一方面提供了一种胶质瘤细胞株，该细胞株为含有编码IL-17基因的U87MG胶质瘤细胞株，所述的IL-17为免疫细胞亚群Th17的标记分子。

本发明另一方面提供了一种制备上述胶质瘤细胞株的方法，该方法包括以下步骤：首先将所述IL-17基因的cDNA与19-T载体连接构建19-T-IL-17载体；再构建pEGFP-N1-IL-17真核载体；将构建的pEGFP-N1-IL-17真核载体转染U87MG胶质瘤细胞株；筛选成功转染了pEGFP-N1-IL-17真核载体的U87MG细胞株并鉴定。

本发明的表达IL-17的胶质瘤细胞株，可用于胶质瘤研究动物模型中，用于观察稳定表达IL-17状态下胶质瘤细胞的成瘤情况，同时可通过荧光标签实时观察到胶质瘤细胞在动物模型体内位置，为研究IL-17在胶质瘤发生、发展中的作用提供了基础。

附图说明

图1为IL-17cDNA的PCR扩增产物电泳图谱；

图2为鉴定19-T-IL-17载体的电泳图谱；

图3为鉴定19-T-IL-17载体的测序图谱；

图4为鉴定pEGFP-N1-IL-17真核载体的电泳图谱；

图5为鉴定pEGFP-N1-IL-17真核载体的测序图谱；

图6为荧光显微镜观察结果；

图7为定量PCR方法检测pEGFP-N1-IL-17-U87MG、pEGFP-N1-U87MG、U87MG培养细胞IL-17mRNA浓度的对比结果；

图8为ELISA方法检测pEGFP-N1-IL-17-U87MG、pEGFP-N1-U87MG、U87MG培养细胞的IL-17表达水平的对比结果。

图9为pEGFP-N1-IL-17-U87MG、pEGFP-N1-U87MG、U87MG三细胞株注射裸鼠后在39天时成瘤图；

图10为定量PCR方法检测pEGFP-N1-IL-17-U87MG、pEGFP-N1-U87MG、U87MG成瘤细胞中IL-17mRNA浓度的对比结果。

具体实施方式

制备表达IL-17的胶质瘤细胞株pEGFP-N1-IL-17-U87MG

步骤一：IL-17cDNA合成