[发明专利]鉴别经典PRRS和HPRRS的胶体金快速诊断试纸条有效
申请号: | 201210069493.5 | 申请日: | 2012-03-16 |
公开(公告)号: | CN102621319A | 公开(公告)日: | 2012-08-01 |
发明(设计)人: | 丁壮;刘慧;母连志;韩明明;姜翠翠;李想;朱利塞;黄志强 | 申请(专利权)人: | 吉林大学 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577;G01N33/569 |
代理公司: | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人: | 王薇 |
地址: | 130062 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 鉴别 经典 prrs hprrs 胶体 快速 诊断 试纸 | ||
1.一种鉴别经典PRRS和HPRRS的胶体金快速诊断试纸条,其特征在于:试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫依次粘附在不吸水的支撑薄片上;其中结合垫上包被有胶体金标记的经典PRRSV特有抗原;硝酸纤维素膜上分别包被有SPA构成的检测线T线和抗经典PRRS单克隆抗体2B9构成的质控线C线。
2.根据权利要求1所述的一种鉴别经典PRRS和HPRRS的胶体金快速诊断试纸条,其特征在于所述的结合垫上包被的胶体金标记PRRS特有抗原,其制备方法如下:将公司合成好的的PRRS Nsp2区30个氨基酸即经典PRRS特有抗原,用该抗原标记胶体金,制备金标抗原,用0.1M碳酸钾调胶体金的PH值至8.2,按100ug抗体/毫升胶体金加入经典PRRS特有抗原,磁力搅拌器混匀30分钟,加BSA至终浓度为1%,静置1小时;4℃ 13000rpm离心30分钟,弃上清,沉淀用标记洗涤保存液洗涤两次,用十分之一初始胶体金体积的洗涤保存液重悬沉淀,4℃备用;将结合垫浸泡于封闭液即2%BSA、0.5%吐温-20、2.5%蔗糖、0.05%叠氮钠、0.01M PBS中30分钟,37℃烘干;然后将制备好的金标抗原均匀喷涂于结合垫上,每毫升铺20平方厘米,冻干、保存。
3.根据权利要求1所述的一种鉴别经典PRRS和HPRRS的胶体金快速诊断试纸条,其特征在于所述的硝酸纤维素膜上包被有SPA构成的检测线T线,其中SPA有可与任何IgG的Fc段结合的特点,将SPA稀释到50-100ug/ml,调整机器划线为T线,即为检测线靠近结合垫,距结合垫端约5mm。
4.根据权利要求1所述的一种鉴别经典PRRS和HPRRS的胶体金快速诊断试纸条,其特征在于所述的质控线C线是用包被缓冲液将抗经典PRRS单克隆抗体2B9稀释到50-100ug/ml,调整机器划线为C线,即为对照线靠近吸收垫,距吸收垫端约3mm;两线距离5-8mm,在硝酸纤维素膜NC膜上的质控线上,可与金标抗原结合,以此检验试纸条的有效性。
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