[发明专利]重组链球菌溶血素O蛋白、核苷酸序列、制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种重组链球菌溶血素O蛋白、该重组蛋白的核苷酸序列、该重组蛋白的制备方法和应用。

背景技术

链球菌溶血素O(Streptolysin O，SLO)是由A群链球菌产生的一种外毒素，它是一种具有溶血活性的蛋白质，能溶解人及一些动物的红细胞。人体感染溶血性链球菌后，血清中可出现大量抗链球菌溶血素O抗体(Antibodies Against Streptolysin O，ASO)。

在临床检测中，ASO是诊断链球菌感染后变态反应性疾病(风湿热、肾小球肾炎)的重要指标之一。常用的ASO检测方法主要有自动化胶乳比浊法、乳胶凝集试验、和溶血抑制法。胶乳比浊法由于其敏感性好、结果重复性好、自动化程度高、受人为因素影响小等众多优点，而作为检测ASO的最佳方法。

胶乳比浊法检测ASO的原理是：样品中的ASO能够与试剂中的SLO抗原包被的胶乳复合物进行反应，形成抗原-抗体复合物，通过测定吸光度的变化并对照标准品的吸光度变化从而计算出样品中ASO的活性单位。

胶乳比浊法ASO检测试剂的生产瓶颈在于SLO抗原的获得，天然SLO抗原价格昂贵，难于获得，存在产率低、批间差大等问题，妨碍了ASO检测试剂的工业化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组链球菌溶血素O(Streptolysin O，SLO)蛋白。

本发明的另一目的在于提供一种抗原，一种可编码表达上述SLO重组蛋白的核苷酸序列，以及包含所述核苷酸序列的载体、重组细胞。

本发明的再一目的在于提供及该重组SLO蛋白的制备方法，以及该重组SLO蛋白及其核苷酸序列在链球菌相关检测等领域的应用和用途。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种重组链球菌溶血素O(SLO)蛋白，其在天然链球菌溶血素O蛋白的530位包含氨基酸缺失或改变，且缺失了天然链球菌溶血素O蛋白N端的77个氨基酸，其中，所述氨基酸的改变为将天然链球菌溶血素O第530位的半胱氨酸突变为Xaa，Xaa选自Ala、Arg、Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。

进一步的优选，突变为Ser、Thr、Ala中的任一种。

更进一步的优选，突变为Ala。

上述重组SLO蛋白可为SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的重组SLO蛋白。

本发明还公开了可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

上述核苷酸序列可为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。

上述核苷酸序列还可为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列进行1个或几个核苷酸取代而得到的密码子同义突变的核苷酸序列。

同时，本发明还公开了一种抗原，该抗原的氨基酸序列包含上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

具体的，该抗原的氨基酸序列包含SEQ ID NO.2所示序列。

本发明进一步提供了一种载体，该载体包含可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

具体的，上述载体包含SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。

该载体可进一步由可编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列与表达载体经重组得到。所述表达载体为含有转录和翻译插入的编码序列所需的元件的空载体。

上述表达载体可为pET21W7或pEGFP_BMP7等。

具体的，上述载体可由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列插入pET21W7或pEGFP_BMP7等表达载体经重组得到。

本发明还进一步提供了一种重组细胞，该重组细胞可包含编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

具体的，该重组细胞包含SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

该重组细胞可包含载体，该载体包含编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列。

具体的，该重组细胞包含载体，该载体包含SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

该重组细胞可包含载体，该载体可由编码上述重组SLO蛋白的核苷酸序列与表达载体经重组得到。

具体的，该重组细胞可包含载体，该载体可由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列与表达载体经重组得到。

具体的，所述表达载体可为pET21W7或pEGFP_BMP7等。