[发明专利]一种提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法

权利要求书

1.一种提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：该培养方法包括以下步骤：

Ⅰ、消毒处理：

A、选取菊花的茎段外植体，进行表面消毒处理；该表面消毒处理为：先将所述的茎段外植体用自来水冲洗，再放入吐温溶液中浸泡，得到表面消毒的茎段外植体；

B、将所述的表面消毒的茎段外植体转入超净台中，用酒精溶液浸泡，再用NaClO溶液浸泡，最后用灭菌的蒸馏水冲洗，得到灭菌后的茎段外植体；

Ⅱ、无菌苗培养：

将所述的灭菌后的茎段外植体转入生根培养基，进行无菌苗培养，得到无菌苗；

Ⅲ、体细胞胚诱导培养：

将所述的无菌苗的叶片剪成叶盘外植体，转入诱导培养基，进行体细胞胚诱导培养，得到胚性愈伤组织和所述的菊花体细胞胚。

2.根据权利要求1所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：

步骤Ⅱ中，所述的生根培养基是以MS基本培养基成分中的大量元素减为原来的1/2、其他成分不变，得到的1/2MS培养基为基础，添加α-萘乙酸 （NAA）0.1mg/L；

步骤Ⅲ中，所述的诱导培养基是以MS基本培养基为基础，添加2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）3mg/L，6-苄基腺嘌呤（6-BA）2-3.5mg/L。

3.根据权利要求1或2所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：

步骤Ⅲ中，所述的诱导培养基是以MS基本培养基为基础，添加2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）3mg/L，6-苄基腺嘌呤（6-BA）3mg/L。

4.根据权利要求1或2所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：

步骤Ⅲ中，所述的诱导培养基是以MS基本培养基为基础，添加2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）3mg/L，6-苄基腺嘌呤（6-BA）2mg/L。

5.根据权利要求1或2所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：

步骤Ⅲ中，所述的诱导培养基是以MS基本培养基为基础，添加2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）3mg/L，6-苄基腺嘌呤（6-BA）2.8mg/L。

6.根据权利要求1或2所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：

步骤Ⅲ中，所述的诱导培养基是以MS基本培养基为基础，添加2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）3mg/L，6-苄基腺嘌呤（6-BA）3.2mg/L。

7.根据权利要求1或2所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：步骤Ⅲ中，所述的体细胞胚诱导培养中，先进行暗培养，再进行光照培养；所述的暗培养的时间为8-12天。

8.根据权利要求7所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：步骤Ⅲ中，所述的体细胞胚诱导培养的温度为25°C；所述的光照培养中，光/暗周期为16h/8h。 

9.根据权利要求1或2所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：所述的叶盘外植体源于苗龄18-20天的所述的无菌苗顶部第1-5片叶片。

10.根据权利要求1或2所述的提高菊花体细胞胚再生效率的培养方法，其特征在于：所述的菊花的品种为 “神马”。