[发明专利]玉蝉花的纳米组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是玉蝉花的组织培养方法。

背景技术

鸢尾属(Iris)为鸢尾科(Iridaceae)多年生草本植物,广泛分布于北温带,以中国至中东(古地中海)为分化中心。中国鸢尾属资源非常丰富,尤其是主要分布在西南、西北及东北地区的无髯鸢尾类群。鸢尾的生态适应性广,抗性较强,适宜在不同生境下栽培,耐粗放管理,繁殖系数较高,特别适合荒山绿化、水土保持、盐碱地改良,而且具有很高的观赏价值,根茎可药用,在初春和秋季霜后,还可以作为牛羊饲料,应用前景极其广泛。国内对鸢尾的研究起步较晚,且以分类学研究为主,大多数种类仍处于尚未开发利用的野生状态。

玉蝉花(I.ensata) 主要分布在日本、朝鲜以及我国东北三省、山东和浙江昌化等地。花蓝紫色,花色艳丽,株形优美,是园林绿化和湿地修复的良种,也是繁育花菖蒲品杂交种的重要种质资源,对该物种的保育研究也具有重要的实际意义。

与其它根茎类鸢尾相同,玉蝉花兼备有性即种子和无性即分株两种繁殖方式，然而，利用种子繁殖，速度慢，繁殖效率低，且变异率高，而利用分株繁殖则会导致分株苗生长势越来越弱，利用组培技术繁育玉蝉花的技术尚未有人研究，优良品种的推广普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加剧，严重影响了玉蝉花的园林应用和推广。

发明内容

本发明针对现有的不足提供了一种玉蝉花的育苗方法。

本发明通过以下方法实现上述目的。

玉蝉花的纳米组织培养方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

（1）外植体的选择：在玉蝉花开花之前取花葶的茎段和分节点作为外植体；

（2）材料处理方法：先用无菌水将外植体冲洗干净，去除叶鞘，切成具有1-4个腋芽、长3-5cm段，用0.5g/L的多菌灵溶液浸泡2-3个小时，紫外灯照射20 min，再用75%乙醇消毒30秒钟，用0.1%升汞水浸泡20分钟，无菌水冲洗5-6次，取出材料，切成具有一个腋芽、长度为1cm左右的小段，最后用12%次氯酸钠杀菌30秒，无菌水冲洗5-6次；

（3）初代培养：在无菌的条件下将步骤②得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了3.0mg/L的6-BA、1.2mg/L的NAA, 30mg/L的蔗糖，5mg/mL-20mg/mL纳米助剂，PH 5.9，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2100-2200lux，待培养出的外植体带芽量长至3个时，即开始下一个阶段；

所述的纳米助剂的制备方法为：将海泡石、蒙脱石粘土混合溶液在0℃下搅拌活化 2 h，加入十二烷基硫酸钠，3×104 r／min高剪切3 h，反应溶液冷却至室温后减压抽滤，所得沉淀在105℃下干燥至恒重，得到纳米助剂。

（5）生根培养：将继代培养的高度超过2.5cm的新苗剪下接种在生根培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了0.7mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA，0.2mg/L的GA，28mg/L的蔗糖，PH 5.9，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2100-2200lux，待新苗长至2.3cm左右时，即开始下一个阶段；

（6）炼苗移栽：将长高至10-15cm、长根≥５根的组培苗带瓶移至普通大棚内，放置1-3天后打开瓶盖，在25-28℃，湿度70-80％，光强７100-7900lx条件下炼苗3-5天，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比腐殖土∶草炭∶珍珠岩=3∶2∶2 的混合基质中，温度控制在28℃，前5d 湿度控制在90%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。

有益效果

本发明对玉蝉花采用组织培养技术，具有以下优点：

1、本发明针对玉蝉花原产地的气候特点，提高了组培过程中的光强度和并延长了光照周期，降低了培养温度，从而使培养环境更接近其原生地的气候，通过对初代培养基、生根培养基配方的精确筛选，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果。

2、在炼苗移栽中通过逐渐提高光照强度，并且在移栽过程中，逐渐降低湿度、严格控制温度，采用合适的基质配方，最终提高了生根试管苗的成活率。

3、通过组织培养，其繁殖系数高，能周年繁殖，适合工厂化育苗，大大缩短了育种的时间。