[发明专利]一种构树简便组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种构树简便组培方法，属生物技术领域。

背景技术

构树（Broussonetia papyriferaL）属桑科，系多年生阔叶乔木，具有速生、适应性强、分布广、热量高、轮伐期短的特点。构树是一种投资少、周期短、见效快、受益长的特种经济林树种，主要分布于我国黄河、长江及珠江流域。构树的韧皮部纤维含量高，纤维长而细，品质优良，是生产制造宣纸和造币纸的优质原料；树叶富含蛋白质、氨基酸、维生素、碳水化合物以及微量元素，是加工畜类饲料的纯天然绿色原料。加快构树培育速度，扩大构树资源是保证宣纸制造和饲料加工业持续发展的重要基础，也是增加农民收益的重要途径。

构树组织培养，一方面可以扩大其繁殖系数，从而实现规模化繁殖；另一方面，可以在保存其原有的优良性状的基础上，实现构树种苗的快速繁殖和壮苗生产。构树组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的构树组织培养方法要求接种过程、培养过程都在无菌培养基中进行，无菌消毒耗能大，人工操作成本高。如果能通过培养基改造，获得既保证构树组织正常生长，又具有杀菌、抗菌或抑菌功能的培养基，菌类也就不能在培养基中滋生。由于这种改造后的培养基不需要进行高温高压灭菌，一方面可以降低构树组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展构树组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，组织培养过程中的污染问题得到有效控制，构树组织培养无需在严格的无菌环境中进行，从根本上简化了构树组织培养。因此，构树简便组培的关键是培养基的改造，具体是找到一种或多种能够添加到培养基中，既具有广谱性杀菌、抗菌或抑菌能力，又不会对构树生长产生毒害或抑制，即不影响构树生长的物质。

发明内容

本发明的目的是提供一种构树简便组培方法。

 　 本发明的目的是通过以下方法实现的。

　　本发明的一种构树简便组培方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

　  1. 抑菌剂的配制：抑菌剂1号的配制方法：在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，并用蒸馏水定容到100 ml，为抑菌剂1号；抑菌剂2号的配制方法：在益培隆杀菌剂A瓶药剂中加入20 ml蒸馏水稀释后与B瓶药剂混合，再加入次氯酸钠溶液10～20 ml，并用蒸馏水定容至100 ml，为抑菌剂2号；所述益培隆杀菌剂由A瓶药剂和B瓶药剂组成，由市场购得；所述次氯酸钠溶液为分析纯，活性氯的重量百分比不低于0.5%；

　　2. 培养容器消毒：将培养瓶及瓶盖在抑菌剂1号与水的体积比为0.3 %～0.5 %（Ｖ/Ｖ）的水溶液中浸泡不少于10 h，保存备用；

3. 培养基配制：诱导培养基为MS+0.5～1.0 mg/L 6-BA+0.1～0.5 mg/L NAA+3～5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3.5 g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1～0.5 mg/L NAA+3～5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3.5 g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.1～0.5 mg/L NAA+3～5 ml/L抑菌剂2号+20 g/L蔗糖+3.5 g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄氨基嘌吟；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培养基时，先不加抑菌剂2号，按各培养基配方配齐其他原料后，用蒸馏水定容、加热至琼脂粉完全溶解，然后按各培养基配方添加抑菌剂2号，用1 mol/L的NaOH或1 mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到培养容器中，封口，冷却凝固，备用；

4. 诱导培养：将采集的构树枝条用酒精消毒后，用0.1 %的升汞溶液消毒6 min，取出用无菌水冲洗后，接种于诱导培养基上；培养室温度为28 ℃，光照12 h，光照强度为1400 lx； 

　  5. 增殖培养：将诱导出的芽苗切成带腋芽的茎段接种到增殖培养基上，30 d转接一次；培养室温度为26 ℃，光照12 h，光照强度为1400 lx；

　  6. 生根培养：当苗长到2～4 cm时，将丛生苗切成单株，接种到生根培养基上，25 d移栽；