[发明专利]测量对多西他赛抗药性或敏感性的方法

说明书

本申请为分案申请，原申请的申请日为2005年12月1日，申请号为200580041847.3(PCT/US2005/043578)，发明名称为“测量对多西他赛抗药性或敏感性的方法”。

发明领域

本发明涉及某些新颖、有效且在此之前是未知的方法，这些方法通过测量特定遗传标记物较对照物的增加或减少，可预测或监测患者对于紫杉醇类(taxoid)化合物分子的反应。本发明还提供了某些试剂盒，这些试剂盒通过测量特定遗传标记物的核酸或蛋白质水平并与对照物或参照标记物比较，可预测或监测患者对于紫杉醇类分子的反应。

发明背景

多西他赛(Docetaxel)是一种抗有丝分裂药物，广泛地用于乳癌、肺癌和卵巢癌的治疗，其次，还用于头颈部、胃部和前列腺的癌症治疗(Hong，Oncology 16：9，2002)。多西他赛通过与β-微管蛋白结合以及阻止α-和β-微管蛋白异二聚体的分解来抑制微管动力学过程，从而终止肿瘤的生长(Ringel和Horwitz，J Natl Cancer Inst 83：288，1991)。多西他赛和一种相关紫杉烷(taxane)即泰素(paclitaxel)的抗肿瘤活性，起因于靶向有丝分裂纺锤体的微管，阻止染色体的排列和分离，阻止细胞周期进程并激活凋亡途径(Wang等，Cancer 88：2619，2000)。通过涉及p53/p21waf1/Cip1、raf/ras和有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)的细胞信号事件，泰素的促凋亡活性与Bcl-2的磷酸化和失活被联系起来(Wang等，Cancer 88：2619，2000)。虽然多西他赛是一种比泰素更有效的抗癌剂，但涉及其细胞毒性的途径却尚未很好地确定(Katsumata，Br J Cancer 89：S9，2003)。在所选择的细胞系中观察到了多西他赛通过一种涉及Bcl-2磷酸化和胱天蛋白酶-3(caspase-3)活化的机制所诱导的凋亡(Kolfschoten等，Biochem Pharmacol 63：733，2002)。在各种培养的细胞系内调节紫杉烷诱导的细胞杀伤作用的其它蛋白包括HeLa细胞内的Aurora-A(Anand等，Cancer Cell3：51，2003)、乳腺癌细胞内的HER-2(Tanabe等，Int J Oncol 22：875，2003)、胶质母细胞瘤细胞内的p21waf1/Cip1(Li等，J Biol Chem 277：11352，2002)以及卵巢癌细胞内的JNK/MKK1(Lee等，J Biol Chem 273：28253，1998)。

在本领域内存在着一种需要，即需要鉴别某些可诱导多西他赛抗药性的药用蛋白，这种抗药性使这些蛋白在药物开发过程中可用于鉴别那些可消除其活体内功能并能提高细胞对于抗肿瘤药物化疗敏感性的药剂(小分子、siRNA等)。在本领域内还需要一种测定方法，用于在化疗前可靠地预测哪些患者在接受基于多西他赛抗肿瘤药物的化疗之后会有起色，而哪些患者则不会。申请人在本文中描述了一种新颖的测定方法，该测定方法能预测对于多西他赛的抗药性和/或敏感性，并为能消除癌症抗药性的新疗法的发展提供了某些筛选方法。

发明概述

依照本发明提供了某些新颖和有效的方法，通过比较患者和对照物体内特定遗传标记物的活化和/或表达的水平，监测和/或预测患者对紫杉醇类分子的反应。

在一实施方案中，本发明提供了一种预测或监测癌症患者对紫杉醇类分子的反应的方法，其包括以下步骤：

a)从所述患者的癌症区域获得测试样品；

b)获得对照样品；

c)测量一种或一种以上遗传标记物的水平；以及

d)在测试样品和对照样品之间比较所测量的所述一种或一种以上遗传标记物的水平；

其中，与对照样品相比，在测试样品内所测量的所述一种或一种以上遗传标记物水平的下降表明对紫杉醇类分子抗药性的增强。

在本发明该方面所提供的特定遗传标记物包括：

BubR1：人(Homo spiens)的类似于蛋白激酶(BUBR1)mRNA，完全cds(互补DNA)(GenBank登录号：AF046079)；

Mad2：人MAD2蛋白的mRNA(GenBank登录号：AJ000186)；