[发明专利]鸭圆环病毒和鸭肝炎病毒二重PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种鸭圆环病毒和鸭肝炎病毒二重PCR检测试剂盒。

背景技术

鸭圆环病毒(DuckCircovirus，DuCV)和鸭肝炎病毒(DHV)均常见于鸭，鸭圆环病毒(DuCV)可造成鸭生长迟缓、羽毛凌乱、体重减轻等症状，可感染禽类的免疫系统，引起免疫抑制。鸭肝炎病毒(DHV)引起的鸭病毒性肝炎是一种可使病鸭高度致死的迅速传播的病毒性疾病，病程短且死亡快，死亡率可高达100％。这两种疾病流行广泛，传播迅速，发病率和死亡率高，易混合感染，目前对世界范围水禽危害较为严重，给养鸭业带来巨大的经济损失。鸭圆环病毒破坏病鸭的免疫系统，造成免疫抑制，鸭肝炎病毒流行广泛且高度致死，病鸭极易同时感染这两种病毒，一旦同时发生感染则会造成极大的损失。目前对DuCV和DHV的鉴别诊断主要依靠传统的病原分离鉴定与血清学试验，但这些方法存在诊断时间长，特异性差，敏感性低，而且操作繁琐等的缺点，不利于快速诊断这两种疾病。

PCR技术由于具有敏感性高、特异性好、快速、简便等特点，已经走进临床诊断实验室并广泛应用于各种禽病病原体的检测，包括用于DuCV和DHV的检测。二重PCR是一种特殊的PCR形式，其突出特点是，一次PCR反应，能同时检测并鉴别出两种病原体，在临床上具有很高的应用价值。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒的引物组。

本发明提供的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；

所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。

上述引物组中，所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为2∶2∶(1.5-2)∶(1.5-2)；

上述引物组中，所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比具体为2∶2∶1.8∶1.8。

本发明的另一个目的是提供一种检测鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒的PCR试剂。

本发明提供的PCR试剂，由上述的引物组、PCR缓冲液和水组成；

所述引物组中的引物1在所述PCR试剂中的终浓度具体为2μmol/L；

所述引物组中的引物2在所述PCR试剂中的终浓度具体为2μmol/L；

所述引物组中的引物3在所述PCR试剂中的终浓度具体为1.5-2μmol/L；

所述引物组中的引物4在所述PCR试剂中的终浓度具体为1.5-2μmol/L；

所述引物组中的引物3在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为1.8μmol/L；

所述引物组中的引物4在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为1.8μmol/L。

本发明的第三个目的是提供一种检测鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒的PCR试剂盒。

本发明提供的PCR试剂盒，包括上述的引物组或上述PCR试剂。

上述的引物组或上述PCR试剂或上述试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒产品中的应用也是本发明保护的范围。

上述检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭圆环病毒与鸭肝炎病毒为用上述的引物组或上述PCR试剂或上述试剂盒对所述待测样品进行二重PCR扩增。

上述应用中，所述二重PCR扩增的退火温度为50℃-55℃，所述二重PCR扩增的退火温度具体为55℃。

本发明的第四个目的是提供一种检测鸭圆环病毒的引物对A。

本发明提供的引物对A，由上述的引物组中的所述引物1和所述引物2组成；

本发明的第五个目的是提供一种检测鸭肝炎病毒的引物对B。

本发明提供的引物对B，由上述的引物组中的所述引物3和所述引物4组成。

上述的引物对A在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭圆环病毒产品中的应用也是本发明保护的范围；

上述的引物对B在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有鸭肝炎病毒产品中的应用也是本发明保护的范围。

本发明的实验证明，本发明建立一次PCR反应就能同时检测和鉴别DuCV、DHV两种病原体的二重PCR技术，具有良好特异性，而且本试验在引物设计上利用扩增片段长度的不同直接判定扩增结果，使得该方法在结果判定时更简便、直观和实用。利用二重PCR一次可以扩增多个目的基因特点，一次PCR反应就可以检测多种病原体，这在临床应用中，对检测不同病原体感染，具有十分重要实用价值和实践意义。

附图说明