[发明专利]试剂比色与光谱检测相结合的毒死蜱农药残留速测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，特别涉及基于试剂比色与光谱技术相结合的一种试剂比色与光谱检测相结合的毒死蜱农药残留速测方法。

背景技术

在世界人口不断增长的今天，粮食需求越来越趋于紧张。估计到2020年，世界粮食需求量将由2000年的19.04亿吨增长至24.87亿吨，但耕地却有减无增。同时，当前在农业生产中遭受病虫草等危害的情况年年总有发生。据统计，每年全世界因受病虫草害所减少的粮食产量，约占粮食总量的30％左右。农药在粮食增产方面发挥着极为重要的作用，可以说如果停止使用农药等化学品，全世界就会有上亿人面临着饥饿的威胁，今后在相当长的时期内，农药将是实现粮食产量增加的重要措施之一。

世界农药产量自1985年以后维持在200-250万吨。我国自1990年开始，农药产量位于世界第二位，并且由1991年的25.3万吨增加到1999年的42.6万吨。我国的农药生产使用经历了20世纪50年代的砷、铅、汞制剂已于上世纪70年代起就停止使用；自80年代有机氯农药由于化学性质稳定，残留时间长，脂溶性强，且利用率较低，给土壤和农业环境造成严重污染等原因被停用以后，各类取代农药便得到快速发展，其中最主要的就是有机磷农药。

近年来，有机磷农药的检测方法得到迅速发展。世界各国的专家都加速开展快速、灵敏、准确、简便的检测方法的研究。根据有机磷农药的化学特性和毒理学性质，检测有机磷农药的分析方法主要有波谱法、色谱法和酶抑制法。另外，还有经典的化学比色法、薄层分析法、免疫法等。近年来，生物传感器技术因具有灵敏、快速、选择性高、一般不须对样品进行预处理、适合现场和在线检测等优点，成为研究的热点。此外，人们还开展了生物芯片技术的研究。

(1)波谱法

该方法是根据有机磷农药中某些官能团或水解、还原产物与特殊的显色剂在一定的条件下，发生氧化、磺酸化、酯化、络合等化学反应，产生特定波长的颜色反应来进行定性或定量(限量)测定。早期所用的只是一种微量化学试验法。

(2)色谱法

色谱法是目前有机磷农药的最主要检测方法，根据检测过程中的物理化学特性又可分为薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法三类。

薄层色谱法是一种较为成熟的、应用也较广泛的微量快速检测方法，先用适宜的溶剂提取有机磷农药，经纯化浓缩后，在薄层硅胶板上分离展开，显色后再与标准有机磷农药比较其比移值(Rf)进行定性测定，也可用薄层扫描仪进行定量测定。该方法的特点是经济、简便、快速，但其精确度不是太高，检出限通常为0.1-0.01ug。

气相色谱法是进入20世纪50年代以后，在柱层析的基础上发展起来的一种新型的仪器分析方法，已成为目前典型的、应用最广的仪器分析方法。该方法是利用经提取、纯化、浓缩后的有机磷农药注入气相色谱柱，程序升温气化后，不同的有机磷农药在固定相中分离，经不同的检测器检测扫描绘出气相色谱图，通过保留时间来定性，通过峰高或峰面积与标准曲线对照来定量。该方法的检测精度非常高，可以检出1ng。

高效液相色谱法是在液相柱层析的基础上，引入气相色谱理论并加以改进而发展起来的色谱分析方法。与气相色谱法相比，不仅分离效能好，灵敏度高，检测速度快，而且应用面广。但缺点是价格昂贵，难以大面积推广。

(3)酶抑制法

酶抑制法是利用有机磷农药的毒理特性建立的一种快速检测方法。由于有机磷农药可以抑制乙酰胆碱酯酶(Acctylcholinesterase，简称AchE)的活性，在无有机磷农药存在时，乙酰胆碱(Acetylcholine，简称：Ach)在AcHE作用下可以产生胆碱和乙酸；当有有机磷农药存在时，Ache的活性受到抑制，作为其分解产物的乙酸也相应减少。利用上述反应特性，根据指示剂颜色或反应液pH值的变化，就可以达到检测有机磷农药的目的。

(4)免疫分析

免疫分析法是利用抗原和相应抗体在体外也能特异性结合的原理发展起来的一类特异、灵敏、快速的检测技术，由于其内在的优势，广泛应用于包括农药残留检测在内的诸多领域。

(5)生物芯片技术

生物芯片的概念源于计算机芯片，生物芯片技术是在一小片固相载体上储存大量的生物信息(多至几十万个)，并与生物化学处理等技术相结合而发展起来的一种新兴技术。将抗有机磷抗体固定于生物芯片上，通过被标记过的抗原(有机磷与其他大分子物质的结合物)与抗体的特异性结合反应达到对有机磷的检测。