[发明专利]用于特异地检测抗性生物的培养基

说明书

本申请是申请日为2006年2月9日、申请号为200680004645.6、发明名称为“用于特异地检测抗性生物的培养基”的发明专利申请的分案申请。

本发明领域是通过生物化学方法的微生物学分析的领域，并且特别是检测和鉴定微生物例如尤其是细菌或酵母的领域。

细菌对抗生素的抗性是主要的公共卫生问题。感染性微生物对治疗的抗性与抗感染分子同时形成，并且目前代表了治疗中的主要障碍。这种抗性负责多种问题的根源，包括实验室检测的困难，有限的治疗选择和对临床结果的有害影响。

特别地，在过去20年中致病性细菌抗性的快速且抑制不住的增加代表了医学中的主要流行问题之一。由这些生物引起的感染是住院时间延长的原因，并且与治疗失败后的高发病率和死亡率相关。

在一个菌株中可以同时涉及几种抗性机制。它们一般分为3类：抗生素不能渗透到细菌中，通过细菌的酶系统来使抗生素失活或排出，以及细菌靶和抗生素之间缺乏亲和力。

就所涉及的物种和抗生素的数目而言，酶促失活是获得性抗性的最常见的机制。因此，染色体C类头孢菌素酶目前构成革兰氏阴性菌中占优势的抗性机制之一，革兰氏阴性菌表达对头孢菌素类具有抗性的此类酶。类似地，β-内酰胺酶是由某些细菌表达的酶，其能够水解β-内酰胺环(其是β-丙氨酸类家族的抗生素的基本结构)的C-N键，从而产生在微生物学上失活的产物。已开发了几种β-内酰胺酶抑制剂(BLI)，例如克拉维酸(CA)、三唑巴坦和舒巴坦，以增加抗微生物活性并扩展与之相关的β-丙氨酸类的谱系。由于这些抑制剂充当β-内酰胺酶的自杀底物，因而防止了抗生素的酶促降解并允许它们有效对抗最初有抗性的细菌。然而，由于菌株持续暴露于抗生素压力，所以细菌通过β-内酰胺酶的连续且动态的产生而表现出它们的适应能力，所述β-内酰胺酶在形成新分子的同时进行进化。

因此，产生高水平染色体C类头孢菌素酶(céphalosporinases chromosomiques de classe C haut niveau)的革兰氏阴性细菌(称为Case HN细菌)，以及产生广谱β-内酰胺酶(β-lactamases à spectre étendu)的革兰氏阴性细菌(因而称为BLSE细菌)，已成为日益增加的威胁，特别是因为所涉及的细菌种类数目日益增加。CaseHN和BLSE细菌不仅对基于第1代和第2代青霉素类和头孢菌素类的治疗有抗性，还对第3代头孢菌素类(C3G)(头孢噻肟CTX、头孢他啶CAZ、头孢泊肟CPD、头孢曲松CRO)和单环内酰胺类(氨曲南ATM)有抗性。相反地，7α-甲氧基头孢菌素类(头霉素：头孢西丁、头孢替坦)和碳青霉烯类(亚胺培南、美罗培南、厄他培南(ertapenem))一般保持了其活性。BLSE被β-内酰胺酶抑制剂(BLI)抑制，这使得能够将它们与其他头孢菌素酶区别开。

因此，这些细菌最常同时表现出针对几种治疗的抗性，这对于建立相关治疗和避免治疗失败造成了困难。因此，大肠杆菌(Escherichia coli)可以是Case HN和BLSE。此外，因为BLSE阳性肠细菌有通过菌株的克隆传递或质粒结合转移而散布抗性的趋势，所以它们代表了传染控制方面的问题。在大多数研究中，大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)仍是最常见的产生BLSE的物种。然而，几年以来，BLSE已大大扩展了它们的宿主物种的名单。因为，许多肠细菌和非发酵型革兰氏阴性杆菌(例如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))物种也已报道为BLSE的生产者。

除了这些BLSE细菌外，还可以提及的是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，它也是形成了许多抗性机制的致病性细菌，例如对于甲氧西林、青霉素、四环素、红霉素、万古霉素的抗性。屎肠球菌(Enterococcus faecium)是在医院环境中发现的另一种多重抗性的细菌，它可以抵抗青霉素、万古霉素和利奈唑胺。结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)通常对异烟肼和利福平具有抗性。其他病原体提供了某些抗性，例如沙门氏菌属(Salmonella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)和链球菌属(Streptococcus)。

因此，从公共卫生观点看来，能够尽快地鉴定此类微生物和此类抗性机制是非常必要的。

一般地，对治疗有抗性的微生物的寻找按照下列步骤进行：

1.获取可能包含所述微生物的生物样品；

2.接种并孵育培养基(18-48小时)以诱导微生物的指数生长；

3.在培养基上定位潜在重要的微生物的菌落；