[发明专利]一种直接检测IL-6抗原的电化学免疫传感器及应用

权利要求书

1.一种直接检测IL-6的电化学免疫传感器，其特征在于所述传感器按下述方法制备：(1)单壁碳纳米管：以硅片或石英片为基底，以Fe/Mo纳米粒子为催化剂，以乙醇作碳源，以氢气作为碳源的载气和保护气，于石英管中1000℃下反应15min，获得单壁碳纳米管；所述Fe/Mo纳米粒子中Fe和Mo物质的量之比为5∶1；(2)单壁碳纳米管/金纳米粒子杂化电极：将单壁碳纳米管用铜丝连接作为工作电极，以铂作为对电极，以摩尔浓度0.1～10mM HAuCl₄水溶液为电解液，在电压为-0.1V～-0.5V下进行电化学沉积5～50s，获得单壁碳纳米管/金纳米粒子杂化电极；(3)单壁碳纳米管/金纳米粒子杂化电极的修饰：将单壁碳纳米管/金纳米粒子杂化电极浸泡在1～10mM的SHCH₂COOH水溶液中，室温下浸泡3～10h，取出，用水清洗，得清洗后的电极置于EDC/NHS混合水溶液中，室温下浸泡10～30min，取出用水清洗后，获得修饰后的单壁碳纳米管/金纳米粒子杂化电极；所述EDC/NHS混合水溶液为1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺的混合水溶液；(4)电化学免疫传感器：将步骤(3)获得的修饰后的单壁碳纳米管/金纳米粒子杂化电极浸泡在10～100μg/ml的IL-6捕获抗体的PBS缓冲液中，室温下浸泡2～8h，取出，用Tween-20水溶液和PBS缓冲液交替清洗，获得结合抗体的杂化电极，然后再将结合抗体的杂化电极浸泡在质量浓度1～5％牛血清蛋白的PBS缓冲液中，室温下浸泡0.5～2h进行封闭，取出，用Tween-20水溶液和PBS缓冲液交替清洗，风干，获得所述的电化学免疫传感器。

2.如权利要求1所述的直接检测IL-6的电化学免疫传感器，其特征在于步骤(3)所述EDC/NHS混合水溶液为1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺与水混合，使1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺终浓度为400mM，N-羟基琥珀酰亚胺终浓度为100mM。

3.如权利要求1所述的直接检测IL-6的电化学免疫传感器，其特征在于步骤(4)所述用Tween-20水溶液和PBS缓冲液交替清洗的方法为：用质量浓度0.01～0.05％Tween-20水溶液和pH7.0～7.3的PBS缓冲液交替清洗5次，再用蒸馏水清洗5次。

4.一种如权利要求1所述的直接检测IL-6抗原的电化学免疫传感器在检测IL-6抗原中的应用。

5.如权利要求4所述的直接检测IL-6抗原的电化学免疫传感器在检测IL-6抗原中的应用，其特征在于所述的应用包括以下步骤：1)将电化学免疫传感器置于IL-6抗原溶液中，37℃下浸泡0.5～2h，反应结束后，取出传感器用质量浓度0.01～0.05％的Tween-20水溶液和pH7.0～7.3的PBS缓冲液交替清洗，获得结合抗原的电化学传感器；2)以步骤1)获得的结合抗原的电化学传感器作为工作电极，以铂丝为对电极，以Ag/AgCl电极作参比电极，在铁氰化钾和氯化钾混合溶液的电解液中，采用电化学方法检测电极表面上的电子传递电阻。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述IL-6抗原溶液为1×10^-17～1×10^-13g/ml的IL-6抗原的PBS缓冲溶液，所述PBS缓冲溶液pH值为7.0～7.3。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述铁氰化钾和氯化钾混合溶液为铁氰化钾、氯化钾和水的混合溶液，所述混合溶液中铁氰化钾终浓度为5mM，氯化钾终浓度为0.1mM。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述电化学方法检测为：在频率为100mHz～10kHz，电压为0.17V的条件下测试电极表面上的电子传递电阻。