[发明专利]采用病毒唑脱除马铃薯病毒的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种采用病毒抑制剂脱除植物病毒的方法，特别涉及一种采用病毒唑脱除几种常见的马铃薯病毒的方法。

背景技术

马铃薯栽培分布较广，是世界上第四大栽培作物。中国则为马铃薯栽培面积最大的国家，马铃薯在我国的工农业生产中占有重要地位，发展我国的马铃薯种植业则具有重要的战略意义。然而，马铃薯作为无性繁殖作物，它易感染各种病毒。通过研究发现，危害马铃薯生长发育的病毒主要有30余种，其中在我国普遍存在而且危害严重的有：马铃薯卷叶病毒(PLRV)，马铃薯Y病毒(PVY)，马铃薯X病毒(PVX)，马铃薯A病毒(PVA)，马铃薯S病毒(PVS)，马铃薯M病毒(PVM)，马铃薯类病毒(PSTVd)等病毒或类病毒。马铃薯体内病毒的积累可使品系种性退化，品质与质量降低，对其生长造成严重危害。

只有采用现代生物技术将种薯内的病毒去掉，恢复马铃薯品种本身的生理功能和生产特性，才能防止马铃薯的退化，使之达到育种家培育之初品种的商品性状和产量。

目前，常用的马铃薯病毒脱除方法包括以下三种：

(1)物理方法。利用一些物理因素如X射线，紫外线，超短波和高温或冷冻处理等处理种薯使病毒钝化，可以达到脱除病毒获得脱毒种薯的目的。其中以热处理钝化病毒的方法最为有效，在35℃下处理56天，或在36℃处理39天，可以除去某些马铃薯品种块茎中的PLRV。其优点是操作简单，短时间内处理大批种薯。缺点是对大多数病毒不能根除，有很大的局限性，而且脱毒效果不理想，同时会造成材料干枯或者死亡。

(2)茎尖分生组织脱毒技术。目前应用最广泛而且在农业生产和商业生产中取得巨大成功的植物脱毒技术，是生物技术中的植株茎尖分生组织培养脱毒技术。根据脱毒难易的程度可排列为：PLRV＜PVA＜PVY＜PAMV＜PVM＜PVX＜PVS＜PVTVd。但是该方法操作难度大，技术含量高。

(3)化学方法。最近研究表明，一些化学药剂能有效地脱除正在生长的植物体内的病毒，其原理为病毒抑制剂在三磷酸状态下会阻止病毒RNA帽子结构形成，从而影响病毒RNA的复制，干扰病毒的正常生长，达到除去病毒的目的。目前常见的病毒抑制剂有：三氮唑核苷(病毒唑)，5-二氢尿嘧啶(DHT)，双乙酰-二氢-5-氮尿嘧啶(DA-DHT)等。在实际应用中，人们往往将这些药物直接加到正常植株生长的培养基上，用以预防病毒感染植物本身。然而，这些病毒抑制剂的加入对植株本身也产生了毒害，即使在非常低的浓度条件下，植株的生长发育也会受到严重影响。因此，采用病毒抑制剂提前预防正常植株感染病毒的方法显得很不科学。

发明内容

鉴于现有技术的不足，发明人通过综合研究各种脱毒方法的优缺点，提供了一种采用病毒唑脱除马铃薯病毒的方法。该方法能有效脱除多种常见的马铃薯病毒，且脱毒植株内病毒含量长时间不会出现恢复现象，同时简单易行，操作方便，可广泛应用于马铃薯脱毒后的无毒种植与生产。

本发明的目的是这样实现的：

一种采用病毒唑脱除马铃薯病毒的方法，其特征在于：将感染病毒的马铃薯苗接种于含有病毒唑的培养基上培养45-135天，且病毒唑在所述培养基中的浓度为75-150mg/L。

优选地，所述采用病毒唑脱除马铃薯病毒的方法，将感染病毒的马铃薯苗接种于含有病毒唑的培养基上培养90-135天。

优选地，所述采用病毒唑脱除马铃薯病毒的方法，病毒唑在所述培养基中的浓度为75-100mg/L。

优选地，所述采用病毒唑脱除马铃薯病毒的方法，所述培养基的成分为：MS+病毒唑。

优选地，所述采用病毒唑脱除马铃薯病毒的方法，所述的培养条件为：光照强度为50-80mol/m²/s，光照时间为16h/D，培养温度为20℃。

进一步优选地，所述的病毒选自如下的一种或多种：马铃薯卷叶病毒(PLRV)，马铃薯Y病毒(PVY)，马铃薯X病毒(PVX)，马铃薯A病毒(PVA)，马铃薯S病毒(PVS)，马铃薯M病毒(PVM)和马铃薯类病毒(PSTVd)。

与现有技术相比，本发明创造性地采用病毒唑脱除马铃薯病毒，通过大量试验摸索出了病毒唑的最佳使用浓度，可以大批量有效脱除几种常见的马铃薯病毒，病毒脱除率高，且脱毒植株内病毒含量长时间不会出现恢复现象，同时简单易行，操作方便，可广泛应用于马铃薯脱毒后的无毒种植与生产。

附图说明

图1PVX病毒唑处理135天病毒含量及后期恢复情况