[发明专利]HPLC波长切换技术测定中药制剂中多种成分含量方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种HPLC波长切换技术同时测定丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂中1~5种成分的含量的方法，可同时测定丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂中的1—5种成分，且测量精度高。 

背景技术

同时测定丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂中1-5种成分的含量，是建立丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂质量标准的重要组成部分，为全面评价中药质量提供依据。目前《中国药典》（2010版）仅采用HPLC固定波长法对丹参中水溶性成分丹酚酸B和脂溶性成分丹参酮Ⅱ_A的含量分别进行了测定。但丹参中有效物质并不是单一的成分，而且每种成分的最大吸收波长是不一样的。通过测定中药的某一个成分含量的高低对该中药进行质量控制不够全面。 

发明内容

本发明的目的是提供一种HPLC波长切换技术同时测定丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂中1-5成分含量的方法，该方法较其他含量检测方法，如单一成分含量检测、非切波长检测等方法，可以做到更全面，准确的控制丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂质量的效果。 

采用的技术方案是： 

一种HPLC波长切换技术同时测定丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂中1-5成分含量的方法，包括下述工艺步骤：

1、丹参酚酸提取物的制备，取丹参药材加水12,10,10倍量，回流提取1-3次，每次1-3h，滤过，合并滤液，并浓缩至药材浓度0.2 -0.5 g/ml，通过AB-8大孔吸附树脂柱，用2-5BV水以2-6V/h的速率洗脱，弃去水洗液，用2-6BV30-70%乙醇以4-8BV/h的速率洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩，干燥，即得。

2、制备供试品溶液，其制备方法如下：取丹参药材0.5 g-1.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，加水10-30倍量，回流提取2-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，并浓缩至相对密度为1.0-1.5，通过5g-15g的AB-8大孔吸附树脂柱，用2-5BV水以3-8BV/h的速率洗脱，弃去水洗液，用2-5BV30-70%乙醇以2BV/h-6BV/h的速率洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩，滤过，即得丹参供试品溶液； 

或者采用丹参酚酸提取物、丹参山楂药对或含丹参山楂药对的中药制剂中的一种制备成供试品溶液，具体方法是：取相当于丹参药材0.6-2.6g的丹参酚酸提取物、丹参山楂药对或含丹参山楂药对的中药制剂精密称定，并分别置具塞锥形瓶中，精密加入30-80%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用30-80%甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，即得。

3、丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂中1-5种成分的含量测定，采用高效液相色谱法，应用波长切换及梯度洗脱技术：取上述制备的一份供试品溶液，上ODS色谱柱（150-250×4.6-6.0mm,2-5μm），梯度洗脱；洗脱液为乙腈与0.1%-0.5%磷酸水混合液；第一梯度洗脱采用乙腈5—10%：磷酸水95—90%的混合液，第二梯度洗脱采用乙腈10—15%：磷酸水90—85%的混合液，第三梯度洗脱采用乙腈15—18%：磷酸水85—72%的混合液；第四梯度洗脱采用乙腈18—18%：磷酸水72—72%的混合液；第五梯度洗脱采用乙腈18—40%：磷酸水72—67%的混合液；  洗脱液流速为0.8-1.2ml/min；检测波长：第一时间段为280nm，第二时间段为330nm，第三时间段为286nm,可依次测定并计算出丹参、丹参酚酸提取物、丹参山楂药对及含丹参山楂药对的中药制剂中1-5种成分的含量，在上述色谱条件下，理论塔板数以丹酚酸B计不低于10000，分离度＞1.5。 

4、制备对照品储备液，其制备方法如下：分别精密称取丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B等1-5个对照品适量，加甲醇制成每1ml含丹参素钠0.2-0.6mg、原儿茶醛0.5-1.0mg、迷迭香酸0.2-1.8mg、紫草酸0.4-0.8mg、丹酚酸B0.8-1.5mg的对照品储备液，备用。分别精密量取上述1-5个对照品储备液适量，加甲醇制成每1 mL含丹参素钠10-20μg、原儿茶醛10-20 μg、迷迭香酸50-100μg、紫草酸100 -200μg、丹酚酸B500 -800μg的混合对照品溶液。 

5、方法学考察：