[发明专利]Egr-1拮抗剂在制备治疗Ⅱ型糖尿病的药物中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及Egr-1作为治疗Ⅱ型糖尿病靶标的应用，尤其是涉及Egr-1拮抗剂在制备治疗Ⅱ型糖尿病的药物中的用途。 

背景技术

II 型糖尿病是一种常见病，多发病，在我国以及全世界都具有很高的发病率，在我国，II型糖尿病已经成为发病率增长最快的疾病。最新资料表明，我国糖尿病患者已超过 6000 万，占全球糖尿病患者的五分之一。预计截止到2025年我国糖尿病患者总数将接近 1亿。 

II 型糖尿病是一种多病因的代谢疾病，除内在的遗传因素外，还与人们生活环境、生活方式及行为有很大的关系，特别是过度肥胖引起的一些代谢紊乱易导致 II 型糖尿病。II 型糖尿病又称为非胰岛素依赖型糖尿病，是指肌肉和脂肪组织对胰岛素产生抗性，作为补偿，胰岛β细胞则分泌更多的胰岛素，但仍不能把血糖维持在正常范围内。另外，过量的胰岛素分泌使胰岛β细胞功能受到损伤，导致胰岛素分泌不足。胰岛素抵抗是指机体靶组织对胰岛素的反应性低于正常的一种病理生理状态，经常与肥胖，II 型糖尿病早期阶段等临床疾病相伴随，是这些疾病的一个重要的特征，也是导致这些疾病发生的重要因素。但是造成胰岛素抵抗以及由此导致的肥胖，II 型糖尿病等相关疾病的分子机制并不是很清楚。这就导致了其防治的困难。 

Egr-1 基因普遍存在于从酵母到人的真核细胞基因组中,进化上高度保守。多种外界刺激都可促进Egr-1表达并使其活化 ,活化的Egr-1与靶基因启动子区上特异结合位点作用而调控不同靶基因的转录。目前已证实多种行使各类功能的基因的转录需要 Egr-1 参与，包括与细胞生长分化和细胞凋亡、炎性细胞趋化、免疫刺激等相关的多种基因。Egr-1的生物学功能主要是通过激活或抑制这些靶基因的表达实现的。 

有研究表明，在前列腺癌组织中，转录因子Egr-1过表达，而且利用特定的反义寡核苷酸抑制Egr-1的表达，能够逆转前列腺癌细胞的转化。值得一提的是，已经有临床前研究利用针对Egr-1的反义寡核苷酸防止肺移植后形成炎症和血栓。另外，Egr-1在肺慢性阻塞性疾病（COPD）、动脉粥样硬化、儿童哮喘、白血病等疾病中都有重要的调节作用。 

发明内容

本发明的提供一种新的Ⅱ型糖尿病相关疾病的药物靶点。 

本发明涉及人类基因功能，特别是涉及与Ⅱ型糖尿病的Egr-1基因功能。检测Ⅱ型糖尿病病人脂肪组织以及相关动物体内实验证明了Egr-1基因的高表达，通过建立胰岛素抵抗脂肪细胞的细胞模型进行进一步的研究，表明Egr-1在胰岛素抵抗的情况下受到胰岛素信号通路的调节。胰岛素长期刺激实验表明，正常脂肪细胞应答胰岛素这一过程是依赖于Egr-1的转录活性的，Egr-1的表达受到胰岛素的调控。本发明还通过构建了控制Egr-1表达的相关腺病毒和Egr-1的干扰序列进行深入的探究，研究发现干扰Egr-1的表达可以缓解胰岛素抵抗，说明抑制Egr-1的表达能够增加胰岛素敏感性，防止胰岛素抵抗。因此Egr-1可以作为Ⅱ型糖尿病相关疾病理想的药物靶点。 

因此，本发明在另一方面提供了Egr-1拮抗剂在制备治疗II型糖尿病的药物中的用途。 

在一个实施方案中，所述Egr-1拮抗剂增加胰岛素敏感性，防止胰岛素抵抗。 

在一个实施方案中，本发明的Egr-1拮抗剂是抑制Egr-1基因转录和/或翻译的拮抗剂，优选为针对Egr-1的siRNA。在一个实施方案中，所述siRNA靶向下列序列：5’-UCUCCCAGGACAAUUGAAAUUUGCU-3’(SEQ ID NO:1)，并且所述siRNA的序列优选为5’-AGCAAAUUUC AAUUGUCCUG GGAGA-3’ (SEQ ID NO:2)。 

在另一个实施方案中，本发明的Egr-1拮抗剂是包含锌指结构域(Egr-1第331-427位氨基酸)的显性无效Egr-1，优选为表达所述显性无效Egr-1的DNEgr-1腺病毒。 

附图说明

图1显示了14 例Ⅱ型糖尿病病人脂肪组织中 Egr-1 的表达水平。其中提取人组织标本 RNA，并用实时荧光定量 PCR 检测基因表达。 

图2  A，含有大量脂滴的脂肪细胞，油红染色后脂肪细胞；B，胰岛素抵抗细胞 IRS的活性；C，胰岛素抵抗细胞的葡萄糖摄取能力。 

图3  胰岛素抵抗细胞中 Egr-1 应答胰岛素刺激上调并调控细胞的葡糖摄取能力  A，胰岛素抵抗细胞中 Egr-1依然能应答胰岛素刺激而上调；B，在胰岛素抵抗细胞中过表达 DN-Egr-1 使细胞对葡糖的摄取得到显著恢复。