[发明专利]一种大菱鲆未受精卵的质量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于卵子质量检测技术领域，具体是一种大菱鲆未受精卵的质量检测方法。 

背景技术

大菱鲆(Scophthalmus maximus)是当前欧洲的重要海水养殖鱼类之一，自1992年大菱鲆被引进中国以来，在水产科研工作者和养殖企业的共同努力下，大菱鲆在工业化养殖领域取得了重大成效，最高年产量达5万吨以上，年产值逾40亿元，从而成为我国水产养殖业一个新的经济增长点。 

在大菱鲆等硬骨鱼类人工繁养殖过程中，卵子的质量是影响繁殖性能的一个关键因素，它直接关系到胚胎的发育以及仔、稚、幼鱼的成活和生长，与养殖效率密切相关。雌性亲鱼的营养状况和养殖环境中的光照、水温变化是影响卵子质量的主要因素，此外人工繁育过程催产剂的使用和不同的养殖模式也会对卵子的质量产生影响，因此需要对卵子的质量进行客观、快速的检测，从而优化亲鱼培育，提高养殖效率，同时筛选出的高质量卵子也为深入研究海水硬骨鱼类胚胎发育调控机制提供了有效的平台和保障。目前对大菱鲆卵子质量的评价通常是对其外观形态及生产性状检测，如色泽、沉浮性、受精率和死亡率等。从外观上进行检测虽然速度快，但准确率低；而通过孵化率来检测，虽然具有最高的准确率，但却耗时耗力，无法在最短时间内给出实验结果数据。因此，提供一种快速有效的大菱鲆卵子质量评价方法，可为大菱鲆规模化苗种选育提供技术基础。 

发明内容

本发明目的是提供一种评价大菱鲆卵子质量的新方法，采用此方法可以弥补现有技术的不足，进一步完善卵子质量评价体系。 

本发明通过对大菱鲆未受精卵子内脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)、核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)和蛋白质(protein，Pr)含量的检测，同时结合相应的卵子受精率和孵化率的测定，建立一种评价大菱鲆卵子质量的新方法，为大菱鲆卵子质量评价提供可靠的技术手段。 

申请人在长期的研究中发现，当大菱鲆未受精的卵子RNA浓度在0.780±0.001μg/卵时，且Pr∶RNA∶DNA为227-250∶12-13.5∶1-1.2时，受精率和孵化率最高，此时卵子质量最佳。 

本发明的方法，具体操作如下：首先精确计数卵子的数量，然后将收集的 卵子用无菌蒸馏水冲洗后，通过常规的分子生物学方法获得DNA，DNA，Pr的含量，最后确定卵子的质量。 

上述精确计数卵子的量，可以采用手工计数的方法，也可以采用便携式大菱鲆卵子快速计数板来计数，所述的计数板包括有一个基板，其特征在于，在基板内有用于测量大菱鲆卵子数量的测量孔，所述的测量孔的尺寸(长×宽×高)为10mm×10mm×1mm、20mm×20mm×1mm、40mm×40mm×1mm或124mm×50mm×1mm中的任一种或几种；且测量孔的底部开有不少于一个的用于排水的筛孔，筛孔的直径在0.5mm以内。 

上述的计数板，还包括有一个用于承载基板的底座。 

上述的基板，其长×宽×高尺寸为130mm×128mm×5mm；可以设置有四排测量孔，第一排为10个10mm×10mm×1mm的测量孔，第二排为5个20mm×20mm×1mm的测量孔，第三排为3个40mm×40mm×1mm的测量孔，第四排为1个124mm×50mm×1mm的测量孔。 

所述的获得DNA，DNA，Pr的含量，分别采用CTAB，Trizol，SDS裂解提取法来获得。 

本发明的方法可以快速有效的对大菱鲆卵子质量进行检测，从而可以快速确定待研究的卵子是否符合生产需求，提高了生产效率，同时进一步完善了硬骨鱼类卵子质量评价体系，为研究其他养殖海水鱼类卵子质量评价提供了有效平台和借鉴。 

附图说明

图1：本发明用到的计数板的立体结构示意图； 

图2：本发明用到的计数板的平面示意图； 

其中：1、基板2、测量孔3、筛孔4、底座。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的方法进行详细描述： 

1)确定卵子量： 

用吸管分别吸取1ml、3ml、5ml、10ml大菱鲆卵子和卵巢液的混合物，置于便携式大菱鲆卵子快速计数板顶板内大小不一的方格内，然后计算得出每毫升卵子和卵巢液的混合物中的卵子数，最后根据卵子和卵巢液的混合物体积得出卵子数量；