[发明专利]一种能促进VBNC细菌生长并提高分离丰度的复苏培养基及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种能促进VBNC细菌生长并提高分离丰度的复苏培养基，其特征在于：该复苏培养基由培养基基液、细菌液和土壤液构成；所述的细菌液由藤黄微球菌菌种在菌种液体培养基上培养至对数期后期，经离心去除菌种液体培养基提取获得蛋白质，含有复活促进因子Rpf，细菌液按体积比为培养基基液的0.5-30%；所述的土壤液由经风干、过筛、去除杂质的土壤，加水，多次灭菌，过滤取滤液或离心取上清液，土壤液按体积比为培养基基液的0.1-20%。

2.根据权利要求1所述的一种能促进VBNC细菌生长并提高分离丰度的复苏培养基，其特征在于细菌液按体积比为培养基基液的1-10%，土壤液按体积比为培养基基液的1-5%。

3.根据权利要求1或2所述的一种能促进VBNC细菌生长并提高分离丰度的复苏培养基，其特征在于培养基基液选用以下配方中的一种：

A、一般细菌复苏培养使用的配方：

细菌用胰蛋白胨   8.0~15.0g，

酵母抽提液       3.0~8.0g，

麦芽提取物       3.0~8.0g，

牛肉膏           1.0~3.0g，

酪蛋白氨基酸     3.0~8.0g，

甘油             1.0~3.0g，

吐温-80          0.03~0.1g，

七水硫酸镁       0.5~2.0g，

加去离子水1000mL，调节pH7.0；

B、适合革兰氏阳性菌无枝菌酸菌属的配方：

葡萄糖         2.0 ~6.0g，

酵母抽提液     2.0 ~6.0g，

麦芽抽提液     0.6~2.0 g，

蒸馏水         1000.0 ml，pH 7.2, 配置琼脂培养基时加用碳酸钙1.0 ~3.0g；

C、适合革兰氏阳性菌节杆菌属、红球菌、莱夫氏属、诺卡氏属、北里孢属、链霉菌属、枯草杆菌属、类芽孢杆菌属的配方：

蛋白胨       3.0~8.0 g

酵母提取物    1.0~5.5 g，

葡萄糖        0.5~2.0 g，

β-苯乙醇     2.0 ~4.0ml，

杀真菌素      0.03~0.08 g，

放线菌酮      0.02~0.08 g，

去离子水      1000 ml,pH 7.0；

D、适合贫营养土壤生态中的细菌的配方：

营养肉汤       1.0~2.50 g，

酵母提取液     0.20 ~1.0g，

蒸馏水         1000 ml,pH 7.0；

E、适合贫营养深水生态中的细菌的配方：

酪蛋白         1.0~3.0 g，

豆粕           0.10~0.50 g，

氯化钠         0.20~1.0 g，

磷酸氢二钾     0.1~0.5 g，

葡萄糖         0.1~0.5 g，

蒸馏水        1000 ml，pH 7.3 。

4.根据权利要求3所述的一种能促进VBNC细菌生长并提高分离丰度的复苏培养基，其特征在于配制固体培养基时，在所述的A、B、C、D或E的各组配方中加琼脂15~20g，经110~130℃、10~30min高压灭菌后冷却使用。