[发明专利]海湾扇贝耐热相关热休克蛋白70基因标记及其辅助育种方法

权利要求书

1.一种海湾扇贝耐热相关热休克蛋白70基因标记，其特征在于：海湾扇贝耐热相关热休克蛋白70基因标记为序列表SEQ ID No.1碱基序列所示，起始密码子上游第83个碱基A、第408个碱基T、第480个碱基A、第967个碱基G、第999个碱基C、第1107个碱基T、第1108个碱基A和第1248个碱基A为抗热基因位点。

2.权利要求1所述的海湾扇贝耐热相关热休克蛋白70基因标记，其特征在于：所述海湾扇贝耐热相关热休克蛋白70基因标记的获得，按如下步骤：

1)海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子区的多态性分析：从海湾扇贝闭壳肌中提取基因组DNA作为基因扩增模板，采用AiHSP70pF和AiHSP70pR引物对热休克蛋白70基因启动子区进行扩增得到DNA序列，将克隆得到的DNA序列连入T载体，而后对克隆体进行测序，其多态性位点，分别是-1248A/G，-1108C/A，-1107A/T，-999A/C，-967G/C，-894A/T，-480A/C，-408A/T，-204C/G，-83A/G和-28A/G；引物AiHSP70pF为5′-aaaaccataacggcttgccatactaacc-3′，AiHSP70pR为5′-caggacaaccccaagttatgtggcat-3′；

2)耐热相关热休克蛋白70基因标记的筛选：随机提取50个热敏感个体和50个耐热个体的基因组DNA后，PCR扩增热休克蛋白70启动子区序列，将扩增产物纯化后进行测序分析，所述11处多态性位点中，其中7处检测到3种基因型，分别是-1248A/G，-1108C/A，-1107A/T，-999A/C，-967G/C，-894A/T和-408A/T；另外4处检测到2种基因型，分别是-480A/C，-204C/G，-83A/G和-28A/G；经Chi-square Test分析，-1248A/A，-1108A/A，-1107T/T，-999C/C，-967G/G，-480A/A，-408T/T和-83A/G个体在耐热群体中出现的频率显著高于热敏感群体，即-1248A/A，-1108A/A，-1107T/T，-999C/C，-967G/G，-480A/A，-408T/T和-83A/G作为耐热相关的热休克蛋白70基因标记。

3.一种权利要求1所述海湾扇贝耐热相关热休克蛋白70基因标记辅助育种方法，其特征在于：以在耐热群体中高频出现的热休克蛋白70基因型作为耐热相关热休克蛋白70基因标记，将携带这种耐热相关基因标记的海湾扇贝进行繁殖，培育后代，克隆得到后代中的热休克蛋白70基因启动子区序列，研究其多态性；同时进行热胁迫处理实验，研究耐热相关热休克蛋白70基因标记的遗传规律及其与海湾扇贝耐热能力的关系，从中筛选出既带有耐热相关热休克蛋白70基因标记、耐热能力又显著提高的贝苗进行多代繁殖和培育后即可建立耐热新品种。