[发明专利]花生耐盐相关基因Rab7及其在提高耐盐性中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及花生耐盐相关基因Rab7(AhRab7)及其在提高耐盐性中的应用。

背景技术

花生是重要的油料作物和经济作物，在我国农业生产乃至整个国民经济中具有重要地位。盐胁迫抑制了花生的生长，导致植株萎蔫、荚果增大减缓、小果显著增多、产量降低，同时使荚果品质变劣，商品价值明显降低。随着环境的不断恶化，培育具有耐盐性的作物新品种已成为广大育种家研究的主要目标之一。当前发展迅速的基因工程技术为植物遗传改良提供了新的途径，利用在盐胁迫应答中起重要作用的基因进行遗传转化是获得耐盐新种质的重要手段。因此，发掘重要的耐盐基因资源，将为花生的耐盐遗传改良奠定坚实基础。

Rab蛋白是小GTP结合蛋白家族最大的亚族，作为囊泡运输的分子开关，它不断在GDP和GTP结合状态之间转换，在囊泡的形成、转运、粘附和融合过程中起着重要作用。Rab蛋白不仅调节着激酶的活性，而且进一步影响细胞的生长、分化和凋亡，它调节着植物的生长发育、形态建成，参与植物对细菌病原应答中抗菌化合物的极性分泌过程。当植物受外界因子如干旱、盐碱、病害胁迫时，也有许多Rab蛋白被诱导表达。在Rab亚家族中，Rab7蛋白主要调节早期内体-晚期内体-溶酶体和液泡的物质运输，它能将高盐离子运输到液泡中并排出体外，减少盐离子对植物体的损伤，它还能清除逆境胁迫产生的活性氧，保护和修复内膜系统，提高植物的抗逆性。但目前在花生中还未见Rab7基因克隆及其功能研究的报道。

发明内容

本发明提供了花生耐盐相关基因AhRab7及其在耐盐性中的应用，本发明通过将AhRab7基因分别转入花生和大肠杆菌中，可以显著提高它们的耐盐性。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

花生耐盐相关基因AhRab7，其序列表如SEQ ID No:1所示。

所述AhRab7基因有7个外显子，分别对应的碱基为173-225，554-580，743-842，1611-1757，1860-1940，2099-2244，3167-3249。 

克隆所述花生AhRab7基因的引物名称与序列如下：

P1：5- TGCTTTGATTTGAGGAGGAC-3；

P2：5- ATATCTCAGCATTCACAACC -3，

所述P1和P2分别与Rab7基因第1-20碱基、第3235-3254碱基对应。

本发明还提供了含有所述的花生耐盐相关基因AhRab7的载体。

本发明还提供了所述的花生耐盐相关基因AhRab7编码的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示，所述氨基酸序列中有GTP结合结构域/水解结构域。

本发明还提供了所述的花生耐盐相关基因AhRab7在提高耐盐性的应用，所述花生Rab7基因可提高花生和大肠杆菌的耐盐性。

将花生AhRab7基因在花生中超量表达，花生转基因幼苗的耐盐浓度为12‰ NaCl。

将花生AhRab7基因转入大肠杆菌，表达产物为23KDa，大肠杆菌的耐盐浓度为15% NaCl。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：

1、本发明从花生中克隆了AhRab7基因（测序结果表明该基因有7个外显子， 分别对应的碱基为173-225，554-580，743-842，1611-1757，1860-1940，2099-2244，3167-3249；氨基酸序列中有GTP结合结构域/水解结构域，分别对应的氨基酸残基为15-22，62-66，124-128，156-160。

2、转AhRab7基因花生植株形态发育正常，转基因花生苗抗12‰NaCl的胁迫；本发明将AhRab7基因在花生过量表达可显著提高其耐盐性。

3、AhRab7基因转化大肠杆菌，重组菌可以抗15% NaCl的胁迫。

4、转化体系非常有效。在较短的时间内(6w)可以获得大量抗性苗，这是获得大量转基因苗并从中筛选出耐盐性明显提高的转基因植株的重要前提。

结合附图阅读本发明的具体实施方式后，本发明的其他特点和优点将变得更加清楚。

附图说明