[发明专利]一种参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种参芪扶正注射液的指纹图谱的构建方法，其特征包括：取参芪扶正注射液样品经0.45μm微孔滤膜滤过，精密吸取75μl，注入双泵双梯度高效液相色谱仪测定；色谱条件为采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱温30℃；以乙腈-水为流动相，梯度洗脱，流速为0.6ml/min；以紫外检测器与蒸发光散射检测器串联检测，且紫外检测波长由266nm /208nm切换的方式检测；理论塔板数按毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷峰计应不低于3000。

2.根据权利要求书1所述参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是，所述色谱柱包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的预柱和分析柱，样品的前处理是运用双泵双梯度高效液相色谱仪，通过阀切换系统，实现样品的在线自动净化；阀切换系统由两个泵，一根预柱、一根分析柱通过高压回路转换阀连接而成，样品从进样器进样后，由装载泵将预处理流动相2%乙腈带入预处理柱，被测化合物被保留在预柱上，而水溶性杂质随预处理流动相排入废液中，之后将阀切换至与分析柱相接状态，分析泵用分析流动相将被测组分正冲入分析柱分离分析。

3.根据权利要求书1所述参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是，采用乙腈-水为流动相进行梯度洗脱：0min－5min，乙腈由2%－5%；5min－30min，乙腈由5%－30%；30min－40min，乙腈由30%－60%；40min－40.5min，乙腈由60%－90%；40.5min－50min，乙腈保持90%；50min－50.5min，乙腈由90%－2%；50.5min－60min，乙腈由保持2%；其中0～40分钟为指纹图谱采集及分析时间，40～60分钟为洗柱时间，记录0～40分钟的色谱图。

4.根据权利要求书4所述参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是，以紫外检测器与蒸发光散射检测器先后串联检测，且紫外检测波长由266nm /208nm切换的方式检测，共检测出21个共有峰，以[9]号峰毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷为参照，各峰的保留时间与[9]号峰保留时间的比值分别为0.14、0.18、0.25、0.27、0.33、0.41、0.66、0.75、1.00、1.08、1.10、1.12、1.21、1.29、1.31、1.37、1.41、1.53、1.59、1.63、1.69；其中1～9号共有峰，采用266nm检测得到；10～17号共有峰采用208nm检测得到；18～21号共有峰采用蒸发光散射检测器检测得到。

5.根据权利要求书5所述参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是，对10批参芪扶正注射液进行检测，用指纹图谱相似度评价软件分析得到参芪扶正注射液HPLC标准指纹图谱，具有21个共有峰；其中，归属于党参的特征峰为 [1]、[5]、[7]、[10]、[13]号峰，共 5个峰；归属于黄芪的特征峰为 [3]、[8]、[9]、[11]、[12]、[14]、[15]、[16]、[17]、[18]、[19]、[20]、[21]号峰，共13个峰；两者共有的有 [2]、 [4]、[6]号峰，共3个峰。

6.根据权利要求书5所述参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是：利用对照品对照法确证3号峰为腺嘌呤、5号峰5-羟甲基糠醛、9号峰为毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、13号峰为党参炔苷、14号峰为芒柄花苷、20号峰为黄芪甲苷；利用UFLC-DAD-MS/MS技术手段对共有峰进行色谱峰归属及峰纯度检查，紫外吸收曲线的比较，并通过质谱中分子离子峰、碎片离子峰的精确分子量匹配、保留时间匹配、同位素峰匹配信息的比较指证：

266nm：1号峰为胞苷、2号峰为尿嘧啶、3号峰为腺嘌呤、4号峰为鸟苷、5号峰为5-羟甲基糠醛、6号峰腺苷、7号峰为党参苷Ⅱ、9号峰为毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷；

208nm：10号峰为党参炔-二-葡萄糖苷、11号峰为异微凸剑叶莎醇-2`，7-二-O-葡萄糖苷、12号峰为樱花苷、13号峰为党参炔苷、14号峰为芒柄花苷、15号峰为5-羟基-4`-甲氧基-二氢黄酮-2-α-L-鼠李糖-β-D-葡萄糖苷、16号峰为9,10-二甲氧基紫檀烷-3- O-β-D-葡萄糖苷、17号峰为异微凸剑叶莎醇-7-O-葡萄糖苷；

ELSD：18号峰为黄芪皂苷Ⅵ、19号峰为黄芪皂苷Ⅶ、20号峰为黄芪甲苷、21号峰为黄芪皂苷Ⅱ。

7.根据权利要求书1～权利要求7所述参芪扶正注射液HPLC指纹图谱的构建方法在参芪扶正注射液生产或质量检测中的应用。