[发明专利]鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测试剂盒。

背景技术

鸭新城疫病是由鸭源新城疫病毒(Duck Newcastle Diseases duck NDV)引起的一类急性、高度接触性和致死性的传染病。早期研究发现，鸭对致病性APMV-1具有极强的抵抗力，仅表现为健康带毒，即使强毒感染也不致病。但近年来发现引起高致病性和死亡性的鸭源新城疫病毒的自然流行，对养鸭业危害严重。河北、福州、浙江、山西、山东、河南等地陆续报道该病的发生和流行，上述研究表明，鸭源新城疫病毒的感染呈上升趋势，将对我国的养鸭业产生巨大危害。

鸭圆环病毒(Duck circo virus，DuCV)是圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的一成员，首次在德国报道。近年来，相继有匈牙利、美国、中国台湾及我国山东、辽宁、福建、广东和广西等地发现有鸭圆环病毒造成鸭感染或发病的报道。DuCV造成鸭发病的主要临床表现为发育不良、体重下降及羽毛凌乱等，病理组织表现为法氏囊出现坏死淋巴细胞减少和组织细胞增多。织细胞增生现象感染动物的淋巴组织逐渐萎缩导致免疫功能下降或免疫反应抑制进而提高了二重或多重感染的几率是圆环病毒感染的特征与其它病原菌或病毒的混合感染情形非常复杂。柴同杰对山东的樱桃谷鸭群鸭圆环病毒及混合感染的调查表明，鸭圆环病毒与鸭I型肝炎、鸭疫里默氏杆菌及大肠杆菌的混合感染率较高。屈素洁等对广西部分地区鸭圆环病毒感染情况进行调查，结果表明存在与鸭疫里氏杆菌、新城疫病毒、禽流感病毒和鸭肝炎病毒等病原混合感染现象。

水禽圆环病毒不能在细胞和禽胚上生长，而且该病毒多以亚临床感染形式出现，所以用传统的分离病毒、动物试验方法无法进行诊断。最初诊断圆环病毒主要靠病理组织和电镜观察，但这两种方法都需要专业的技能和敏感性不高。

混合感染给鸭疾病诊断带来了许多困难，不能仅通过临床表现做出诊断，需要借助于分子诊断技术。病毒的分离、琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验等这些方法耗时，不利于病毒的防治。PCR方法具有操作简便、敏感性高、特异性强和重复性好等优点，已成为动物病原检测的重要方法。特别是多重PCR具有可同时检测、鉴别多种病原体突出的特点，在临床多种病原混合感染的鉴别诊断上具有独特的优势和很高的实用价值。但是在一个PCR体系中由于存在多种模板和引物，需要防止引物和模板之间的非特异性结合，避免非特性条带的出现，还要尽量避免引物二聚体的产生。同时，目的片段的大小有合适的梯度和各引物退火条件尽可能相同，以确保2种扩增产物量相对平衡，条件摸索十分重要。

至今尚未见有应用二重PCR对新城疫病毒和鸭圆环病毒检测和诊断的报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测新城疫病毒和鸭圆环病毒的引物组。

本发明提供的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；

所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。

上述引物组中，所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为0.1-0.5∶0.1-0.5∶1∶1；

上述引物组中，所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比具体为0.2∶0.2∶1∶1。

本发明的另一个目的是提供一种检测新城疫病毒和鸭圆环病毒的PCR试剂。

本发明提供的PCR试剂，由上述的引物组、PCR缓冲液和水组成；

所述引物组中的引物1和引物2在所述PCR试剂中的终浓度均具体为0.1μmol/mL-0.5μmol/mL；所述引物1和所述引物2在所述PCR试剂中的终浓度均进一步具体为0.2μmol/mL；

所述引物组中的引物3和引物4在所述PCR试剂中的终浓度均具体为0.8μmol/mL-1.2μmol/mL；所述引物3和所述引物4在所述PCR试剂中的终浓度均进一步具体为1μmol/mL。

上述PCR缓冲液为2×Taq PCR Mix(购自天根.KT201)。

本发明的第三个目的是提供一种检测新城疫病毒和鸭圆环病毒的PCR试剂盒。

本发明提供的PCR试剂盒，包括上述引物组或上述PCR试剂。

上述引物组或上述PCR试剂或上述试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒和鸭圆环病毒产品中的应用也是本发明保护的范围。