[发明专利]检测小麦抗病基因的多重PCR试剂盒及其应用

权利要求书

1.用于鉴定或辅助鉴定待测小麦抗病相关基因的多重PCR引物对组，所述抗病相关基因为Yr17-Lr37-Sr38基因簇和Pch1基因，其特征在于：所述多重PCR引物对组由特异于所述Yr17-Lr37-Sr38基因簇的一个引物对，和特异于所述Pch1基因的一个引物对组成；

所述特异于Yr17-Lr37-Sr38基因簇的一个引物对为序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1；所述特异于Pch1基因的一个引物对为序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2。

2.根据权利要求1所述的引物对组，其特征在于：所述引物对组中每个引物对的两条引物在PCR反应体系中等量使用，且所述引物对1和所述引物对2在PCR反应体系中的摩尔比为1∶1。

3.含有权利要求1或2所述引物对组的试剂盒。

4.权利要求1或2所述引物对组的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括将权利要求1或2所述引物对组中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。

5.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1或2所述的引物对组中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装后，与2×Taq Plus PCRMasterMix溶液包装在同一试剂盒内。

6.权利要求1或2所述引物对组在制备鉴定或辅助鉴定待测小麦抗病相关基因的试剂盒中的应用；所述抗病相关基因为Yr17-Lr37-Sr38基因簇和Pch1基因。

7.鉴定或辅助鉴定待测小麦是否含有Yr17-Lr37-Sr38基因簇，是否含有Pch1基因，以及所述Pch1基因是纯合还是杂合的方法，其特征在于：所述方法包括下述(1)和(2)的步骤：

(1)以待测小麦的基因组DNA为模板，用权利要求1或2所述引物对组进行PCR反应，获得PCR产物；所述PCR反应的退火温度为：前8个循环为55℃；第9-16个循环为65℃；第17-36个循环为55℃；第37-56个循环为65℃；

(2)检测步骤(1)得到的PCR产物的大小，根据PCR产物确定所述待测小麦是否含有或候选含有Yr17-Lr37-Sr38基因簇，是否含有或候选含有Pch1基因，以及所述Pch1基因是纯合还是杂合；

其中，根据PCR产物确定所述待测小麦是否含有或候选含有Yr17-Lr37-Sr38基因簇的方法如下：若所述PCR产物满足如下a1)的条件，则所述待测小麦含有Yr17-Lr37-Sr38基因簇或候选含有Yr17-Lr37-Sr38基因簇；若所述PCR产物不满足如下a1)的条件，则所述待测小麦不含有Yr17-Lr37-Sr38基因簇或候选不含有Yr17-Lr37-Sr38基因簇；

根据PCR产物确定所述待测小麦是否含有或候选含有Pch1基因的方法如下：若所述PCR产物满足如下a2)的条件，则所述待测小麦含有Pch1基因或候选含有所述Pch1基因；若所述PCR产物不满足如下a2)的条件，同时满足如下a3)的条件，则所述待测小麦不含有Pch1基因或候选不含有所述Pch1基因；

根据PCR产物确定所述待测小麦所含所述Pch1基因是纯合还是杂合的方法如下：若所述PCR产物同时满足如下a2)和a3)的条件，则所述待测小麦含有Pch1基因或候选含有所述Pch1基因，且所述Pch1基因为杂合或候选为杂合；若所述PCR产物满足如下a2)的条件，同时不满足如下a3)的条件，则所述待测小麦含有Pch1基因或候选含有所述Pch1基因，且所述Pch1基因为纯合或候选为纯合；

a1)所述PCR产物含有259bp的DNA片段；

a2)所述PCR产物含有240bp的DNA片段；

a3)所述PCR产物含有222bp的DNA片段。

8.权利要求1或2所述引物对组，或权利要求3所述试剂盒在培育小麦抗病品种中的应用。

9.一种培育小麦抗病品种的方法，包括采用通过权利要求7的方法鉴定得到的如下a)或b)中至少一种的小麦作为亲本进行育种的步骤：

a)含有或候选含有Yr17-Lr37-Sr38基因簇；

b)含有或候选含有Pch1基因。

10.根据权利要求6或8所述的应用，或权利要求9所述的方法，其特征在于：所述抗病为抗条锈病、抗叶锈病、抗杆锈病和抗根腐病中的至少一种。