[发明专利]S1P受体激动剂的剂量方案

说明书

本申请是申请日为2005年11月28日、发明名称为“S1P受体激动剂的剂量方案”的中国专利申请200580040968.6的分案申请。

本发明涉及S1P受体调节剂或激动剂的剂量方案，特别是在治疗移植患者或患有自身免疫性疾病或病症的患者的过程中的剂量方案。

S1P受体调节剂或激动剂是作为激动剂于一种或多种磷酸鞘氨醇-1受体、例如S1P1至S1P8发信号的化合物。与S1P受体结合的激动剂例如可以导致细胞内异源三聚体G-蛋白解离成Gα-GTP和Gβγ-GTP，和/或被激动剂占据的受体的磷酸化增加和下游信号途径/激酶的活化。

对于用于治疗哺乳动物、尤其是人的各种病症的药物的制备而言，S1P受体调节剂或激动剂是有价值的化合物。例如，已经在大鼠(皮肤、心、肝、小肠)、狗(肾)和猴子(肾)模型中证明了其在移植中的功效。与环孢菌素A的联合试验显示在大鼠的皮肤和心脏移植模型以及猴子的肾移植模型中存在协同作用。S1P受体激动剂或调节剂与依维莫司(everolimus)联合可延长心脏(大鼠)和肾(猴子)同种移植物的存活。由于其免疫调节功效，S1P受体调节剂或激动剂还可用于治疗炎症和自身免疫疾病。在以下公开物中可以发现S1P受体激动剂的其它特性：

Brinkmann V，Chen S，Feng L等人(2001)，“FTY720在不诱导全身免疫抑制的情况下改变淋巴细胞归巢并保护同种移植物”，Transplant Proc；33：530-531。

Brinkmann V，Pinschewer D，Feng L等人(2001)，“FTY720：通过改变淋巴细胞运输而导致同种移植物保护(综述)”，Transplantation；72：764-769。

Pinschewer DD，Ochsenbein AF，Odermatt B等人(2000)，“FTY720免疫抑制在不影响感应、膨胀和存储的情况下损害了效应器T-细胞外周归巢”，J Immunol；164：5761。

Yanagawa Y，Sugahara K，Kataoka H等人(1998)，“一种新型免疫抑制剂FTY720通过加速大鼠体内淋巴细胞归巢而诱导循环的成熟淋巴细胞的隔离II.FTY720通过降低T细胞浸润至移植物但不产生细胞因子而延长皮肤同种移植物的存活”，J Immunol.；160(11)：5493-9。

现已令人惊讶地发现：特定的剂量方案、例如负荷剂量(loading dose)将提供进一步预想不到的益处。

可以在以下试验中测定S1P受体激动剂或调节剂对各个人S1P受体的结合亲合性：

就化合物对人S1P受体S1P₁、S1P₂、S1P₃、S1P₄和S1P₅的S1P受体激动剂或调节剂活性进行了试验。通过对化合物诱导的GTP[γ-³⁵S]与膜蛋白的结合进行定量来对功能受体活化进行评估，所述膜蛋白由稳定表达适合人S1P受体的被转染的CHO或RH7777细胞制得。所用的试验技术是SPA(闪烁亲近测定法)。简言之，将用DMSO溶解的化合物系列稀释，并在50mM Hepes、100mM NaCl、10mM MgCl₂、10μM GDP、0.1％无脂肪BSA和0.2nM GTP[γ-³⁵S](1200Ci/mmol)存在下将其加入到SPA-小珠(Amersham-Pharmacia)固定的表达S1P受体的膜蛋白中(10-20μg/孔)。在96孔微量滴定板中于RT培养120分钟后，通过离心步骤分离未结合的GTP[γ-³⁵S]。用TOPcount板式读数器(Packard)对由膜结合的GTP[γ-³⁵S]触发的SPA小珠的荧光进行定量。用标准曲线拟合软件计算EC₅₀。在该试验中，S1P受体调节剂或激动剂对S1P受体优选具有＜50nM的结合亲合性。

优选的S1P受体激动剂或调节剂是例如除其S1P结合性质外还具有加速淋巴细胞归巢性质的化合物，例如引起淋巴细胞减少——由淋巴细胞从循环向次级淋巴组织的再分配、优选可逆再分配而产生——但是不会引起广泛性免疫抑制的化合物。原初细胞被隔离；血液的CD4和CD8 T-细胞以及B-细胞被刺激而迁移到淋巴结(LN)和集合淋巴小结(PP)中。

可以在以下血液淋巴细胞消耗试验中测量其淋巴细胞归巢性：

通过管饲法将S1P受体激动剂或调节剂或基质口服给药于大鼠。